木瓜蛋白酶的柔性固定化的研究.pdfVIP

K038 木瓜蛋白酶的柔性固定化研究 1 刘晓宁 沈斌 魏荣卿 韦萍 周华 欧阳平凯 （南京工业大学，制药与生命科学学院，南京 210009） 摘要 以双醛淀粉为柔性接枝链，对不同载体表面进行修饰后对木瓜蛋白酶进行柔性固定化，通过对固定化 条件的优化，得出：用此柔性载体固定木瓜蛋白酶所得到的固定化酶活力回收率达约相当于手臂固定化的 2～ 3 倍。结果说明，双醛淀粉作为接枝链具有维持酶蛋白构象的柔性作用，采用这种“柔性固定化”模型可以 改善传统共价结合固定法及手臂固定化酶活力回收率不高的缺陷。另外对柔性固定化酶的稳定性考察发现其 稳定性远好于游离酶。 关键词 双醛淀粉；柔性固定化；固定化木瓜蛋白酶 1 前言 酶的固定化技术是针对酶制备成本高、再生利用率低及分离困难等问题而发展起来的技 术，它已经在制药、精细化工、日用化学品、食品添加剂及新型材料的制备应用中显示了极 大的应用潜力。有关固定化酶的研究，主要集中在固定化方法、固定化载体选择及酶的活性 等方面，而鲜见对固定化过程中酶稳定性与固定化酶活力回收率之间关系的研究。对于酶等 生物大分子，固定化载体不仅是个异体物质，而且在传统的固定化方法中酶蛋白与刚性载体 在接触碰撞中很容易受到来自于载体的强大撞击力，使其天然构象破坏，造成固定化酶活损 失。本文从高分子材料表面性质、结构与蛋白质的构效之间的关系出发，从分子水平考虑改 善载体表界面的特性，为提高固定化酶活力回收率，而采用酶的柔性固定化模型，即：在固 定化载体上，接上一些有足够长度的且是亲水的分子链，而后再将酶结合到柔性链上。在该 模型中，酶蛋白分子在与含有柔性链的载体相碰撞时，柔性链可通过其链结构的柔顺性来延 长酶蛋白与载体分子作用时间而减少其反冲力[1] （见图1），使固定化酶维持正常构象，从而 提高固定化酶活力回收率。 本文通过对柔性固定化载体的设计、制备及应用，考察柔性固定化模型。其中首先选择 及制备了所需的柔性链（即双醛淀粉），并采用人工合成的高分子微球载体以及天然高分子载 体分别与双醛淀粉柔性链和戊二醛手臂链结合以后，制备了柔性载体及手臂载体，再固定木 瓜蛋白酶（见图 2 ）。并通过对两者固定化结果的比较，考证柔性固定化模型较传统的手臂固 定化方法优劣。 基金项目：国家自然科学基金（No；江苏省十五攻关项目基金（No.BE2001040）资助 通讯联系人，博士生导师.e-mail:xiaoningliu@163.com, 025 图 1 酶的柔性固定化过程模型 乙酰氯 O 四乙烯五胺 O PS C CH PS C CH CH NHRNH PS 3 2 2 2 D 或乙二胺 A S 乙酰化PS微球 胺化PS微球 CHO CHO H N E CHO CHO 2 PS CHO PS E CHO CHO 邻苯二甲酸酸酐