转双抗虫基因三倍体毛白杨抗虫性的研究.pdfVIP

中国造纸学报2004增刊 2004中国科协学术年会第十一分会场论文集 转双抗虫基因三倍体毛白杨抗虫性研究 米丹杨敏生白彦锋 (河北农业大学保定071000) 摘要用转双抗虫基因三倍体毛白杨不同抗虫株系通过室内群体和单体饲养舞毒蛾幼虫，定期观察并计 算幼虫的累计死亡率，发育进度，体重，体长的变化。结果表明，转基因三倍体毛白杨对舞毒蛾幼虫有明 显的致死作用，47号抗性最强，幼虫累计死亡率高达100％；11号、46号对舞毒蛾幼虫的致死率较高，累 计死亡率均在90％以上。不同转基因株系对不同龄期幼虫致死作用不同，毒杀作用主要集中在1龄，其中 46号株系对l龄幼虫的毒杀作用最强，幼虫死亡率达到84．8％。取食转基因株系的幼虫生长发育受到明显 的抑制，其幼虫发育进度显著低于对照。用转基因株系饲养的单体幼虫取食量、体重、体长变化明显低于 对照，且不同株系抗虫性存在差异，11号对2龄抑制作用最强，47号对3、4龄幼虫的抑制作用最强。 关键词双抗虫基因；三倍体毛白杨；抗虫性；舞毒蛾 杨树是我国北方平原地区应用最广泛的造林树种，随着人工造林面积的不断扩大，杨树虫害问 题日益突出且防治困难，使大量杨树生长不良，甚至大面积死亡。利用基因工程手段，培育抗虫杨 树新品种是是解决害虫危害的有效途径。国内外已有在杨树、落叶松、白云杉、枫香树转入抗虫基 造与慈菇蛋白酶抑制剂(API)基因构建了具有不同杀虫机制的双抗虫基因载体，并成功的转化了白 Howe(1994)，Leple(1992)，Confaloniefi 这些研究均获得了转化植株，并表达出一定的抗虫性。为提高三倍体毛白杨的抗虫性，从而更好的 植物表达载体上，通过根癌农杆菌介导将此表达载体上的双基因转入三倍体毛白杨中，获得了一批 对杨扇舟蛾等鳞翅目害虫具高抗性的植株。为了进一步了解不同转基因株系对舞毒蛾等食叶害虫的 抗虫效应和抗虫稳定性，本文就转双抗虫基因三倍体毛白杨不同株系对舞毒蛾幼虫的致死效应和发 育影响进行了研究，为抗虫无性系的筛选和推广提供一定的理论依据。 1材料与方法 测试昆虫为舞毒蛾(Lymantna tomenlosaCaMxP 北农业大学西校区苗圃一年生转BtCrylAc和API基因的三倍体毛白杨[(Populus bolleana)xP．tomenlosa 因的三倍体毛白杨作对照(CK)。 群体饲养方法是于2004年4月在室温下孵化卵块，从中随机挑选幼虫，用毛笔将其轻移至清洁 307 中国造纸学报2004增刊 2004中国科协学术年会第十一分会场论文集 膜扎紧瓶口，每2天换一次新鲜叶片，同时观察并记录幼虫的死亡和蜕皮情况。单体饲养方法是在 取食对照叶片的舞毒蛾中，从2龄、3龄、4龄开始分别挑出各龄期幼虫作单体饲养试验。挑出幼虫 在万分之一天平上分别称重并做好记录，然后用毛笔轻移至罐头瓶中，每瓶1头，5个重复，将采 来的各转基因无性系新鲜叶片剪成4×4cIn2放于罐头瓶中便于计算所食叶面积。每2d换一次新鲜叶 片，同时称量虫重，观察并记录幼虫的死亡和蜕皮I青况。将所食叶片取出后，用硫酸纸拓下所食面 积并用方格纸数出所食方格数，然后放入烘箱中在105(2烘2h后称重，计算所食叶片干重。 2结果和分析 2．1不同转基因株系对舞毒蛾幼虫致死效应 120·00 表1不同株系在不同时期 对舞毒蛾幼虫的杀虫效果 100．00 80·00 薷 U6000 鼷 4000 20·00 000 2d 6d 10d14d18d22d26d30d34d38d 天数(d) 圈1群体饲暮餐件下麓蠢蛾幼电曩计赢f塞 月 日至 月 日用转基因株系11号、 号、 号和：：===：==鼍云慕羞署