日本血吸虫免疫传感器的研究.pdfVIP

日本血吸虫免疫传感器研究舟 沈国励吴朝阳俞汝勤 (化学计量学与化学、生物传感技术教育部重点实验室，湖南大学化学化工学院，长沙 410082) 血吸虫病是世界上分布最广的寄生虫病之～，广泛流行于我国南方各省市， 患者多达一千二百万以上，血防工作依然十分繁重。现有血吸虫病的诊断方法较 多，但迄今尚无理想的能满足现场查病、考核疗效的简便易行、高灵敏、高特异 的方法。目前，国内虽有一些医学单位已在血吸虫病诊断方面做了不少工作，但 大多集中在诊断探针的筛选上，很少从检测方法灵敏度这个根本问题上着手，研 究进展十分缓慢。本室根据血吸虫病诊断的需要，结合实验室在光、电以及声波 等传感技术领域的研究工作，着手进行了日本血吸虫免疫传感器的研究，以期建 立一些高灵敏、高特异、简便易行、能适应于现场应用以及疗效考核的新型日本 血吸虫诊断技术，将血吸虫病诊断方法推向一个新的高度。目前主要进行了一些 压电和电流型血吸虫免疫传感器的研究，取得了一些初步进展。 1压电型日本血吸虫免疫传感器 在免疫分析中，抗原抗体一般都为大分子蛋白质，免疫反应容易引起石英晶 体表面的质量以及界面的粘度、密度等的改变，符合压电传感器的响应特点。近 些年来，压电传感装置在免疫分析中的应用已引起了较大的兴趣。本室已开展的 两类压电型免疫传感器包括：固定抗原(或抗体)的日本血吸虫压电免疫传感器 和无抗原(抗体)固定的日本血吸虫压电免疫传感器。 固定抗原(抗体)的日本血趿虫压电免疫传感器 将日本血吸虫抗原(抗体)固定于石英晶振表面，响应因免疫反应结合到晶 振表面的待测抗体(抗原)引起的质量变化。采用三种抗原抗体固定化方法：一、 以富含羟基的}IE姒和埘A共聚物涂层，通过溴化氰活化，将一种具有高活性的 日本血吸虫分子抗原共价键合固定于石英晶体表面，于气相中测量免疫反应前后 的频移值。该传感器可在7．2—90旭／Ⅲ1较大范围内定量检测日本血吸虫抗体。 此外尚将此传感器用于免疫反应热力学的研究，铡得压电石英晶体表面固定的日 本血吸虫抗原SjA932的表观价数为0．676，反应平衡常数为2．20x105(mol／1)一。 二、应用巯基丙酸在石英晶体金电极表面自组装～带羧基的单分子膜，应用偶联 试剂EDC和NHS共价键合固定日本血吸虫分子抗原。这种巯基自组装单分子 ’国家自然科学基金(No20075∞6)及期南省科委基金资助课题 19 膜对传感器性能影响小，且有良好的机械和化学性能，共价包被了SjA932的血 吸虫免疫传感器可用GHB洗涤再生约10次。三、采用葡萄球蛋白A定向固定 抗体的方法，直接将日本血吸虫抗体固定于石英晶体金电极表面，用于日本血吸 虫循环抗原的测定。应用该方法，不仅能动态监察抗原抗体的反应过程并诊断日 本血吸虫病，而且可定量地考核疗效。 无固定抗原(抗体)的日本血吸虫压电免疫传感器 设计了一种无固定抗原(抗体)的日本血吸虫压电免疫分析方法，将石英晶 振置于聚乙二醇一血吸虫抗体的复合溶液中．加入待测血清，直接响应免疫反应 引起的晶振表面吸附物质质量以及界面的粘度、密度等的改变。在3．6．42．0 ¨g／ml浓度范围内，传感器响应与日本血吸虫特异抗体Ig的含量存在良好的线 性关系，可定量测定各种患者血样中的日本血吸虫特异抗体Ig的含量。方法简 单快速，重现性较好，可望成为～种日本血吸虫病诊断新方法，适合用于广大疫 区分散的无血吸虫病史人群及低年龄组人群的过筛检查。 2、电流型日本血吸虫免疫传感器 j 电流型免疫传感器常借助酶标放大方法，具有较高的灵敏度。本室试验了两 种电流型免疫传感器。一种将石蜡．石墨．日本血吸虫抗原直接构造免疫传感器， 采用竞争免疫分析，将待测样品与辣根过氧化酶标记的日本血吸虫特异抗体混合 进行测量。该方法可通过抛光传感器表面进行再生．且灵敏度较高，测试范围为 0．36，14“虮nl。另一种为应用溶胶凝胶包埋方法，将日本血吸虫抗原包埋于孔 径大小合适的溶胶凝胶中，制成电流型免疫传感器，同样应用竞争免疫分析方法， 对日本血吸虫抗体进行测试，响应范围为O．32—25．6¨咖l。 其它各种用于日本血吸虫循环抗原和日本血吸虫抗体检测的免疫传感器正 在进一步研究之中。