FMOC-OSU作为液相色谱分离分析氨基酸的柱前衍生试剂的研究.pdfVIP

2001年增刊 分析试脸室 Vol.20.Supp1 2001年 11月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 2001-II FMOC-OSU作为液相色谱分离分析氨基酸的柱前衍生试剂研究 丁雅韵，谢孟峡 (北京师范大学分析测试中心，北京100875) 摘要 探讨了FMOC-OSC作为高效酬目色语分离分析勇港酸柱前衍生试别时衍生试剂的用f.衍生坡冲体系的pH值、 衍生时间等因素对衍生反应的影响 研究结果表明衍生试刹过童5倍，叫值在8.00左右衍生45mi。可使衍生反应进 行完全.衍生反应具有良好的重现性，峰面积的相对标准偏差基本小于3.00%.衍生产物德定且衍生具有较好的选择性. 关健词:FMOC-OSC;氛基酸;RP一HPLC;柱前衍生试#.] 氨基酸的液相色谱柱前衍生试剂常见的有丹 2实验结果与讨论 磺酸氯(DNS-C)l’、氮甲酸-9-荀基甲酷(FMOC-C1) 2.1色谱分离条件的选择及衍生的皿复性 止、邻苯二甲醛(OPA)，等。FMOC-OSU作为一种 17种氨基酸用FMOC-OSU衍生后，选择了合适 新型的液相色谱柱前衍生试剂们‘，在一定程度上克 的流动相梯度，对17种氨基酸的19种衍生物进 服了FMOC-Cl的不足之处，即过量的衍生试剂不 行分离，得到令人满意的分离结果(见图1)。 干扰分离:且其衍生物稳定性较好，基体干扰不 在选定的衍生条件及分离条件下，进行六次 明显，衍生选择性也比较好。本文研究HPLC分离 平行衍生，每次衍生收集色谱数据两次，绝大多 17种氨基酸的FMOC-OSU柱前衍生条件，包括衍生 数氨基酸的相对标准偏差在3.0096以内，只有SER 试剂用量，衍生时的pH值.衍生时间以及衍生物 和CYS的相对标准偏差略大于3960 2,2衍生试剂FNOC-OSU用f对衍生反应的影响 稳定性等，得出比较合适的衍生条件。 侧定了当FWC-OSU浓度是样品总浓度1.01 1实验部分 2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,8.0倍时对氨基酸衍 1.1仪器与试剂 液相色谱泵:美国Waters公司510;Rheodyne 生程度的影响，当衍生试剂浓度是氨基酸总浓度 的2-4倍时，大多数氨荃酸衍生物的峰面积变化 7725型六通阀进样器(配以经校正体积为15.2匹 不大，荃本可以认为在此范围内比较恒定:当衍 的定量环)，ChemstationBaseline810数据处理 生试剂浓度增加到氨墓酸总浓度的6-8倍时，虽 软件;Waters490E可变波长紫外一可见检测器: 然大多数氨基酸衍生物峰面积还有所增加，但是 色谱柱为MERCK5H`aC250mmX4.00mm(内径); 此时衍生体系中会出现白色沉淀。因此衍生试剂 所用试剂均为分析纯以上，乙精为美国Fisher公 浓度是氮荃酸总浓度的5倍时比较合适。 司产品 色〔谱纯)。 2.3翻酸缓冲溶液pH值对衍生反应的影响 1.2色谱分析条件 分别采用PH为7.50,8.00,8.50,9.00, 流动相A:25X10mol/L的醋酸盐缓冲溶液， 10.