布鲁菌外膜蛋白Omp22基因的原核表达与生物信息学分析.pdfVIP

动物医学进展 。2015，36(3)：9—12 ProgressinVeterinaryM edicine 布鲁菌外膜蛋 白Omp22基因的原核 表达与生物信息学分析 朱华培 ，赵天靖，徐开莲，贾晓晓，郭莳雨，史巧芸，庞 峰 ， 荣 辉，张珈宁，成 鹰 ，焦寒伟 ，杜 丽，王凤阳 (海南大学农学院，海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海H市动物基 因工程重点实验室，海南海 1：I570228) 摘 要：克隆布鲁茵Omp22基因，原核表达后进行生物学信息分析。根据 GenBank中羊种布鲁菌M5— 90株基 因组 PCR扩 增 出 639bp的 目的基 因片段 ，构建克 隆重组质粒 pMD-20T—Omp22，转化入 E．coli DH5a。测序正确后构建表达重组质粒 pET一28a—Omp22，转化入 E．coliBL21(DE3)。IPTG诱 导表达， Westernblot鉴定诱导融合蛋 白。结果表明，成功克隆 0mp22基 因，构建 pET一28a—Omp22原核表达载体， 在 E．coliBL21(DE3)中表达 Omp22基 因。DNAMan和 BIOEDIT软件生物性息学分析 Omp22融合蛋 白 二级结构 中a一螺旋 占22．17 ；伸展链 占19．81 ；D一折叠 占2．83 ；无规卷 曲占55．19 。说明该蛋 白具有 较 高亲水性。 关键词 ：布鲁茵；外膜蛋白22基 因；克隆；原核表达；生物信息学分析 中图分类号 ：$852．614 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2015)03—0009—04 布鲁菌病 (Brucellosis)是 由布鲁菌 引起的人兽 1 材料与方法 共患性传染病 ，其临床特点为长期发热、多汗 、关节 1．1 材料 痛及肝脾肿大等[1]。布鲁菌(Brucella)为革兰阴性 布鲁菌 M5—90株基 因组和 E．coliDH5 和 E． 小杆菌。大多数动物都可感染布鲁菌 ，但 以羊、牛、 coliBL21(DE3)，由海 口市动物基 因工程重点实验 猪最为易感 ，人也可感染布鲁菌[2]。近年来人感染 室保存 ；原核表达载体 pET一28a(+)，上海捷瑞生物 布鲁菌在我国部分地 区呈上升之势 ，据中国疾病控 工程有 限公司产 品；凝胶 回收试剂盒 、pMD20一T 制与防控 中心报道 ，2010年新增人感染布鲁菌病例 Vector试剂盒，宝生物工程 (大连)有限公司产品；兔 35000多例 J。 抗 His单克隆抗体 ，Merck公司产品；HRP标记 山 布鲁菌免疫原性和抗原保护作用可能与布鲁菌 羊抗兔 IgG，Invitrogen公司产品。 1．2 方法 的外膜蛋 白有关 。当前可用的商业性活布鲁菌疫苗 1．2．1 引物的设计与合成 根据 Omp22外膜蛋 白 有严重的内在缺陷，这就是为什么在许多国家倾 向 基 因的编码框 (基 因序 列号 ：JX040477．1)，利用 于布鲁菌疫苗接种限制[5]。近期 ，有研究表明外膜 DNAMan自行设计上下游 引物 ，设计完成后送上 蛋 白22(Omp22)可能暴露于 S菌的表面 ，与细菌的 海生工生物工程技术服务有限公司合成 。引物序列 脂多糖一样都能够诱导产生保护性免疫反应[6]， 如 下 ： Omp22一~orword：5，_CGGGATCCATGT— Omp22具有高保守性 ，是一种免疫优势抗原与布鲁 TCAAGCGTTCTATCAC一3 ；