粉尘螨过敏原脂肪酶的表达、纯化及生物信息学分析.pdfVIP

第39卷 第 l期 江西师范大学学报 (自然科学版) V01．39No．1 2015年 1月 JournalofJiangxiNormalUniversity(NaturalScience) Jan．2015 文章编号：1000-5862(2015)01-0101-05 粉尘螨过敏原脂肪酶的表达、 纯化及生物信息学分析 幸 鹏 ，刘玉琳 ，喻海琼 ，李 盟。，刘志刚 ，刘晓宇 (1．深圳大学过敏反应 免疫学研究所，广东深圳 518060； 2．南吕大学医学院免疫学教研室，江西南 330006) 摘要：为克隆原核表达并纯化出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白，鉴定其免疫学活性，并分析其分子特征．通过 重组合成粉尘螨新过敏原脂肪酶基因，与pET．28a载体连接后转化大肠埃希菌E．coliTopl0，用异丙基 ． D-硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达重组新过敏原脂肪酶蛋白；经镍柱亲和层析纯化}}I粉尘螨重组脂肪酶 蛋 白，用WesternBlot、ELISA方法检测其免疫原性．用生物信息学软件预测其理化性质、二级结构，并构建 分子进化树．成功表达纯化出高纯度的粉尘螨重组脂肪酶蛋 白，十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)结果显示表达重组产物分子质量约为40kDa，与理论值一致 ，纯化后的表达产物经Western blot印迹检测有明显条带显示．信息学分析显示蛋白二级结构由 螺旋 (16．38％)、延伸主链 (18．93％)、 无规则卷曲(64．69％)组成．成功原核表达出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白，并纯化获得较高纯度及较强免疫 学活性的重组脂肪酶蛋白，为尘螨过敏性疾病的特异性诊断和免疫治疗奠定理论基础． 关键词 ：粉尘螨；过敏原 ；重组脂肪酶；生物信息学分析 中图分类号：R392．11 文献标志码：A DOI：10．16357／j．cnki．issnl000．5862．2015．01．19 有24种过敏原 引．本文在前期对粉尘螨基因组、转 0 引言 录组大规模测序和生物信息学分析的基础上，发现 粉尘螨脂肪酶是潜在 的过敏原．故本文对粉尘螨过 近年来，过敏性疾病诸如过敏性鼻炎 、哮喘等发 敏原脂肪酶蛋 白进行 了克隆、表达及纯化，通过 病率逐年升高，成为全球关注的公众卫生学问题．其 WesternBlot、ELISA检测其免疫活性，并对其进行信 中尘螨是室内主要的过敏原，过敏体质者吸人其排 息学分析． 泄物与死亡残体后可诱发I型变态反应l】，尘螨过 敏原是过敏性哮喘的主要诱因，虽然各个国家之间 1 材料与方法 有地域差异，但是在北美、南美、欧洲、东南亚和澳大 利哑的人 口密集地有 85％的哮喘患者对尘螨过 1．1 材料 敏 J．现阶段对尘螨过敏性疾病 的治疗主要是采用 质粒载体 pET-28a、限制性 内切酶 EcoRI和 尘螨粗体液进行脱敏治疗，虽然尘螨粗体液治疗有 BamHI购 自宝生物工程 (大连)有限公司(TaKa． 一 定效果，但是其成分比较复杂4【J，而不同过敏患 Ra)，辣根过氧化酶(HorseradishPeroxidase，HRP)标 者对尘螨各组分过敏原的敏感性不一样 ，粗体液的 记的链雷亲和素和生物素标记的鼠抗人 lgE抗体均 脱敏治疗难以实现标准化．因此，对尘螨各组分过敏 购 自美 国SouthernBiotech公司，大肠埃希菌 BL21 原的分离、纯化及鉴定以实现特异性诊断与治疗的 (DE3)由深圳大学过敏反应