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稀土离子对苹果酸脱氨酶活性影响的电化学研究‘ 庄乾坤藏怀成 (北京大学化学与分子工程学院北京100871) 关键词计时电流法苹果酸脱氢酶酶活性稀土离子 苹果酸脱氢酶(ECl．1．1．37)广泛存在于生物体的细胞质和线粒体内，在三羧酸循环和苹 果酸蜃徽C酸转换过程中均起枢纽左右【1】。有关一些无机阴离子、金属离子、氨基酸、核苷酸等 对苹果酸脱氢酶活性的影响文献中多有报道【2一I。但稀土离子对其催化活性的影响尚未有人研究。 而且文献多采用光度法，检澳4辅酶NADH在340 nnl处的吸收，该方法的缺点是时间延迟现象难 以克服。本文利用稳态搅拌的计时电流法研究了苹果酸脱氢酶催化苹果酸合成反应的动力学以及 几种稀土离子对酶催化活性的影响。该方法能够实时、连续地检测酶催化反应中NADH浓度的 变化，从而计算出“真正的反应初速度”。 统采用玻炭电极为工作电极，铂丝和饱和甘汞电极分别为对电极和参比电极；猪心线粒体苹果酸 试剂均为分析纯。实验溶液用石英重蒸三次水配制，高纯氮除氧，温度为25士0．5℃。 2NADH的稳态搅拌计时电流实验在稳态搅拌盼溶液中进行计时电流实验．传质过程不受 扩散影响，电极反应物在电极表面的浓度与溶液本体一致，电流很快达到稳态。保持实验条件不 变，稳态电流只与溶液中反应物的浓度有关嘲： h。=删。。[等L=等c： (1) 其中D0为扩散系数，品在固定的实验条件下为一常数，ci为NADH的浓度。在稳态搅拌 mmoFL～0．6 的酶催化体系中，NADH在0．01 mmol／L范围内电流与其浓度成正比，该范围包括 了酶催化反应中NADH的浓度区间。 的衰减速度表示反应速度v。由于溶液体系处于稳态搅拌状态，加入的酶迅速分散到溶液中，反 应立即以最大初速度开始，无时间延迟，图l为苹果酸脱氢酶催化反应的过程曲线。反应开始后 极短时间内(^一)，NADH被氧化的量与时间t成正比，NADH浓度随时问而线性降低．电流 也随时间线性衰减。利用起始线性部分的斜率来计算时间“内NADH浓度变化速度，从而可得 反应初速度Ⅶ (2) vo=一出Mw，出)。=。z--(qMⅢ一co)／(f—to)=c0(1一‘lio)／(t—fo) 酶催化反应开始前，体系中已加入已知浓度的NADH溶液，初始浓度为c0．实际上成为定量测 ’国家自然科学基金资助项目。 分析化学的成就与挑战 定NADH浓度变化的内标．故I比_樾可消除由于固体电极表面难以再现而带来的误差。 4Phm-MDIt催化动力学参数的测定在酶催化反应体系中，固定其他底物和酶的浓度，分 米氏常数x，“和世≯分别为o．56mm01．L-1和o．89mm01．L-l。 图1苹果酸脱氢奠催化反应的过程曲线 5稀土离子对脚口删催化活性的影响在酶催化反应体系中改变稀土离子的浓度，测定酶 催化反应的初速度％，并与不存在稀土离子时的初速度v0相比较。结果说明在较低浓度时，L矿、 o一和Eu”都能够使酶的催化活性显著提高，而且随稀土离子浓度的增加，促进作用随之增强； 当稀土离子浓度进一步提高，均有一个最大促进作用的浓度值：【0+为18p．mol／L，Ce3+为 20 umol／L，E矿为25umol／L。促进作用最大值处酶活性相应地提高为原来的1．56(La”)、 1．32(c矿)和1．38(Eu3+)倍。当稀土离子浓度高于相应的最大促进作用处的浓度值时，稀土 离子的活化作用都会有不同程度地降1氐。 参考文献 l BoyerPnThemzymes．3rded．NewYork：AcademicPress,1975 2 JensenW A’^姗s咖gJMcD．GiotgioJ 3 Dordal A’Mazo A，Gc帕i儿丘Corles九Bioelieta．Int．，1990,20：177 4 RusdnP,V