壳聚糖固定化碱性脂肪酶地研究.pdfVIP

壳聚糖固定化碱性脂肪酶的研究 onChitosan-immobilizedBasic Study Lipase 陈盛魏燕芳蒋意娟 (福建师范大学化学系97级福州350007) 摘要 以蟹壳为原料提取壳聚糖，用戊二醛作交联荆，将碱性脂肪簿固定于亮聚糖上．同时探讨了 一定量干壳聚糖载体与交联剂浓度，给酶量等关系的最适固定化酶条件，并对固定化酶的热稳定性， 操作稳定性，米氏常数，最适温度，离子强度的影响及使用半衰期等理化性质进行探讨． 关键词碱性脂肪酶壳聚糖固专化 0引言 近年来，随着对酶固定化技术研究的深入，探索研究高效廉价的载体引起了生化工作者的重视『1， 2]。 由于壳聚糖具有来源丰富、价格低廉、机械性能好、化学性质稳定、耐热性好等特点，尤其是分 子中含有氨基，既易于与酶共价结合，又可络合金属离子，使酶免受金属离子的抑制，同时又易通过 接枝而改性，是一种急待开发利用的固定化酶的良好载体【3】。 高。因此。本文将通过壳聚糖与戊二醛交联，再将碱性脂肪酶固定化，并对固定化酶的最适条件及稳 定性、最适pH值、最适反应温度、表观米氏常数、离子强度对酶活力影响及该固定化酶的使用半衰期 等理化性质进行了探讨。 脂肪酶(EC3．11．3)是一种水解酶，医药上作为消化剂，工业上用于皮革原料的脱脂、鱼片的脱脂 及油脂水解生产脂肪酸，催化酯的合成或酯交换反应以改善油脂性质，以及用于乳制品增香等。脂肪 酶根据其作用的最适pH可分为酸性、中性和碱性三种。在洗衣粉中添加的一般为中性或碱性脂肪酶。 把脂肪酶加入洗衣粉中，可在较低温度下除去油污。但目前加入洗衣粉中的脂肪酶都未经固定化，这 样加入的酶量大，经济效益不高，易受媒介中各种因素，特别是金属离子的影响。若把脂肪酶固定化 之后形成固定化酶，情况可能有所不同。固定化酶可以重复使用，因而大大提高经济效益。 l材料与方法 1．1材料 碱性脂肪酶(加填充料后的工业品)，本校的生物工程学院提供：底物，橄榄油，中国医药上海化 学试剂公司出品；戊二醛，25％水溶液，生化试剂，中国医药上海化学试剂公司出品；壳聚糖100目， 脱酰度79％，工业产品：聚乙烯醇(P、A)，上海石化水处理剂厂出品；95％7．醇、十八酸、烧碱、均 为分析纯，1％酚酞。 仪器：pH计，上海雷磁仪器厂：电热恒温水浴锅，上海医疗器械五厂生产：电子自动控温水浴锅。 北京长安科学仪器厂；800型离心沉淀器，上海手术器械厂；JB50—D型增力电动搅拌机，上海标本模 型厂制造：HKCB--3型恒控磁力搅拌器，温州市医疗电器厂。 1．2方法 成絮状，洗涤，抽滤，再加入一定浓度的戊二醛，室温下磁力搅拌3．5h，静置过夜，离心弃去上清液， 水洗三次以除去残余戊二醛，抽滤，往交联后的壳聚糖中加入碱性脂肪酶液(含填充料的碱性脂肪酶 离心弃上清，水洗三次，抽滤，即得固定化酶． 1．2．2酶活力测定：原酶活力测定按文献【5】进行，其活力为1000单位，克左右．固定化酶活力测定：在一 2结果 2．1 戊二醛浓度对固定化酶活力的影响 25ml，磁力搅拌3．5h，于4C冰箱中静置过夜，隔天取出，洗涤三次以除去残余戊二醛，抽滤即得交联物。往 得固定化酶。按上述方法测定固定化酶活力，结果如图l所示： 图1表明，固定化酶活力随戊二醛浓 度增大而增大，也即随戊二醛浓度增大， 载体结合的酶量增多。但当戊二醛浓度达 3 3％时，固定化酶活力达最大值。这说明： 金2．5 3％戊二醛足以使壳聚糖分子上的氨基充分 昌 2 发生交联反应，所形成的载体与酶的结合 §1．5 量可达最大；但当戊二醛浓度超过3％时， 鼋 l 固定化酶活力反而降低，是否过量的虎二 0．5 醛使酶变性失活所致。0 2．2给酶量对固定化酶活力的影响 096 平行取8份1．009的壳聚糖与3％戊二 醛的交联物，各加入不同量的酶液(o．29／m1) 图1戊二 使之固定化，按同样方法测定酶活力。结 果见图2： 25 一定量交联之后