修饰模式生物基因组结构%2c探究基因功能.pdfVIP

修饰模式生物基因组结构，研究基因功能牛 戴旭明，李坚，周常文，杨桦，薛红”，傅继粱。 第二军医大学医学遣传学教研室，医学分子遗传学开放实验室， 上海20433。”香港科技大学生物化学系，香港，九龙，清水湾 随着人类基因组计划的顺利进行，已知的DNA序列信息成倍增加，研究基因、基因组 的功能及其调控规律越来越受到人们的藿视，功能基因组学的各项研究已经蓬勃开展。如何 进行有效的基因功能研究已经成了一个普遍关心的问题。在完成了’基于生物信息学比较分 析、靶基因的表达谱分析(组织分布、发育阶段分布以及与特定的生理、病理状态相应的表 达特性等等)后，人们通常还运用体外培养细胞系统进行体外基因功能分析；还运用酵母双 杂交等技术分析蛋白／蛋白、或蛋121,rDNA之间的相互作用，从而分析推导特定基因的功能及 调控规律。然而，基因在活体状态、整体水平上的功能发挥与体外系统所观察的可能还存在 一定的区别，而它却是人们真正认识生命现象本质所必需了解的问题。通过基因工程手段对 模式生物基因组的特定位点进行改造或修饰，并将此修饰的后果在整体水平、活体状态下得 以表现，就可望从中观察到基因修饰的表型效应，从而推导出有关的基因功能。随着模式生 物(如果蝇、酵母、线虫辞)基因组研究的深入，通过基因组修饰研究基因功能方面的进展 也非常迅速。我们试图通过对医学研究中应用雉为广泛的的模式生物一小鼠的基因组进行 修饰，在整体动物水平上研究基因功能，建屯相应疾病的模型。凝血因子Ⅸ基因突变导致 ● 靶基因，来摸索建立活体基因功能研究技术体系，建立r从小鼠基因组噬菌体文库筛选获得 阀源片段、根据基因修饰的舀的设汁构建基因打靶载体、引进并在体外培养Es细胞、通过 ES细胞的基因转移和分子鉴定得到基因组被定向修饰的ES细胞克隆、摸索了ES细胞囊胚 腔转移和嵌合体制备等技术体系。针对基因修饰的不同目的．我们进行了大片段缺失的 略研究，其中，引入点突变的策略依然选用FIX基因，针对人血友病B患者中，FIX基因点 突变造成两种情况(FIX凝血活性和抗原性均丧失型，FIX凝血活性丧失而抗原性保存型)， 分别引入两种类型的点突变，一方面希望获得模拟人血发病B中FIX突变的情况，另一方面 建立引入特定位点特异性的点突变的技术体系。研究数量性状非常有用的引入基因重复的基 性磷酸激酶调节亚基1为靶基因，从噬菌体文库中获得该基因的全长基因组DNA后，构建了 引入基因重复的打靶载体，并在ES细胞中实现了在nck5a基因邻近部位引入一个完整的重 水平观察到nek5a基因重复后，表达水平升高，以及所造成的表型教应。与此同时，通过对 肿瘤抑制基因p16进行可调控的基因修饰，以期通过诱导对特定组织细胞的p16基因进行修 饰。观察p16基因失活后的表型效应，研究它的功能。通过这些工作的进行，已经可以较清 楚地看出，通过在对动物基因组的特定修饰，并观察相应的表型效应，是研究基因功能的有 效手段，在功能基因组研究中，一定会发挥越来越重要的重要。 (95jcHoog)资助a}$通讯联系作者 ．37．