牙科综合治疗台冷却水道生物膜形成探究.pdfVIP

牙科综合治疗台冷却水道生物膜形成研究 浙江大学医学院附属口腔医院 俞雪芬 李 聪 王欣芝 程中必需的设备，其水道系统可由于牙科手机停止转动瞬间回吸入带致病微生物的血液、 唾液而受污染，导致患者间的交叉感染。研究综合治疗台冷却水管道内生物膜形成的时 间、影响因素，对于清除管道内生物膜，控制由于水道引起的交叉感染有一定的指导意义。 1材料与方法 1．1试验器材全新防回吸手机与普通手机各10只，实验用综合治疗台，压力调整 为2．2kg／cm2，出水量为9m1／min，中央净化水系统，Bm培养基， 1．2实验方法选择2台综合治疗台，分成防回吸组和普通组，平均每天治疗时间 为24m抽；实验前更换全新的手机连接管；选择临床就诊需备洞或开髓治疗的患者进行治 疗，按到达医院的先后顺序随机安排治疗。每周采样并更换全新的管道。实验重复3次。 然后改为防回吸组治疗时间是普通组的2倍，重复上述实验。 1．3采样方法(1)雾化冷却水采样完成临床操作后，更换无菌手机，将手机头部 48小时，进行cfu计数。(2)冷却水道生物膜取样：将手机连接管从综合治疗台取下，5％ pvp碘消毒后用无菌剪刀分别在软管的远、中、近处剪取3mm厚度的软管，保存于生理盐 水中备用。冷却水和水管均做阴性对照。 比例加入Tween一20即成，IBST。所有试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水，小心 夹取软管，37‘C荧光黄溶液孵育20分钟，将标本用PBS、TBsT溶液轻轻冲洗，最后用蒸馏 水轻轻冲洗吹干备用。 1．5 CLAM观察与图像处理 TcSsTCs 仪器为LEICA 微镜附带的数码相机拍照。 1．6统计学方法每周采样，以10s为单位，将2组每个相同时间段的菌落计数取 平均值，以方差分析法比较2组之间的差异；分别统计分析2组各时间段的菌落计数，统 计使用软件为SPSSl0。 2结果 2．1微生物菌落培养结果 229 手机连接的冷却水管内取得的微生物菌落数量，普通组与防回吸组均随着治疗时间 的增加与冷却水软管使用时间的延长而增加，但防回吸组的菌落数少于普通组，2组在前 30s，冷却水内的微生物的含量比较高，40s后逐渐下降，防回吸组与普通组菌落数比较， 10s与20s2组间前有明显的统计学意义，p值分别小于O．01和0．05见表1(略)。 2．2激光共聚焦显微镜观察种植体上冷却水管内生物膜结构 在治疗时间相同的情况下，普通手机组，第一周软管内径表面光滑，局部有零星小点 生物膜；第二周生物膜逐渐增多，局部融合成片，表面呈“树突状”，但整个管腔未连接成 条带；第三周的生物膜镜下见基带平稳，在管腔内径连接成连续的条带，密度厚薄不均，有 黑色间隙，“树突状”生物膜厚度增加，高倍镜下(800×，1400×)可见“树突”部分生物膜 联系较紧密，无明显黑色间隙，第四周的生物膜与第三周的基本相同，无明显变化。防回 吸手机组第一周软管内径表面光滑，无生物膜；第二周局部有零星小点生物膜；第三周局 部有表面呈“树突状”的生物膜；第四周生物膜逐渐增多，局部融合成片，但整个管腔未连 接成条带。防回吸手机的治疗时间是普通手机的2倍的情况下，防回吸手机组在第一周 到第四周形成的生物膜，与普通手机组相比较，生物膜的形成时间相同，但厚度、分布范 围，电镜下观看与普通手机组基本相似。 3讨论 3．1生物膜的成熟时间与污染程度有关生物膜是细菌在复杂多变的环境中，通过 产生外部多糖包膜多聚体，使细菌相互粘连形成膜状物。口腔环境中包括需氧菌、兼性厌 氧菌和绝对厌氧菌等各种细菌，这些细菌在手机停止治疗的瞬间回吸进入冷却水管道。 回吸入综合治疗椅冷却水管的细菌，逐渐积累粘附定植形成类似于牙菌斑的微生物膜，嵌 入在含有丰富的多糖、蛋白质、肽和矿物质组成的基质中，因为口腔环境中多为厌氧菌，随 着生物膜厚度不断增加，厌氧环境也趋于成熟完善，从而为细菌进一步的生长繁殖提供物 质基础，使得生物膜的厚度和冷却水管道的污染环境形成正比。本实验结果表明，时间越 长，生物膜荧光强度越大，亦即生物膜越厚或者生物膜结构越复杂。 3．2冷却水管内浮游细菌与生物膜成正反馈在综合治疗台水路管道内细菌以两 种方式存在，定植于微生物膜内和浮游于管道内的浮游菌。表1中可以看出，手机冷却水 中的细菌量随着时间而变化，同时每个以10s为单位的时间段内，随着水管使用时间的延 长，细菌数也逐渐增加(表2)，