新除草剂微型筛选方法——蛋白核小球藻法地研究.pdfVIP

±里些三兰鱼查塑童些重墨垒苎±曼!全堡苎篓 一竺 新除草剂微型筛选方法一一蛋白核小球藻法的研究 马建义陈杰柴伟纲李明智吴声波 杭州310023) (国家南方农药g,JgElq=心浙江基地 摘要：本文首次在国内以蛋白核小球藻(Chlowllap”月Df出删为模式生物对9种不同作用机制的15类24 种除草剂进行了生物筛选试验．结果表明，用蛋白核小球藻筛选除草剂活性的方法快速、敏感，恰好弥补 r培养皿法不足之处，用这种方法可以构成除草剂括性筛选的第二套筛子对化合物进行常规筛选，将减少 具有潜在活性化合物漏筛，而且．这种方法也作为初筛适合于微型高通量筛选的要求。 关键词：除草剂活性高通量筛选大规模微型测试细胞悬浮培养蛋白核小球藻 在新农药的开发研究中，寻找新的化合物变得越来越困难，被誉为开发新农药“眼睛” 的生物筛选模型变得非常重要。以常规的培养皿法和温室盆载法作为初筛的程序要在短时 间内筛选大量的化合物已是难于做到，这也是当今我国新农药开发中的最大难题之一。如 何建立一套快速、准确、用药量少、漏筛小的筛选方法是各大农药开发公司一直研究的课 题，这也是我国新农药开发急待解决的问题。由于组合化学应用于农药合成新化合物的方 法产生，一个公司合成能力达到几十万个，这样，对生物筛选提出了更高的要求，各种离 体筛选的方法应运而生，材料的使用包括植物的器官、组织、单细胞和在分子水平的酶为 靶标，尤其是使用单细胞和酶为直接靶标的筛选方法，极大地加快了生物筛选的速度，这 种微型筛选方法实现了自动化，称之离体高通量筛选(HTS)，使年筛选能力也达到了几十万 只。目前我国农药创制机构对除草剂活性的生物筛选普遍采用培养皿法和盆载法，这种方 法用药量较大，对于抑制光合作用和呼吸作用的化合物不够敏感，利用绿藻为试材正好弥 补了这一缺陷，因此，这种方法是培养皿法的有益和必要的补充。 1．材料与方法 1．1试验材料 蛋白核小球藻(Chlorella 始浓度为8×105个／ml。使用除草剂的种类见表1。 1．2试验方法 I．2．1藻细胞的预培养 将蛋白核小球藻(Chlorella 旋转振荡的条件下预培养7d，使藻细胞快速生长和繁殖。 1．2．2藻细胞的培养测试 ／ml。对照不加，处理加入一定量的除草剂使其不同浓度梯度，在上述条件下振荡培养4d， 以培养液为参比，在最大吸收波长680nm测定吸光值(光程Icm)和藻液的电导率，采用血 球计数板在显微镜下直接计数并测定吸光度，试验设3个平行，建立藻细胞浓度和吸光度 的线性回归关系。抑制率直接采用(对照吸光度一处理吸光度)，对照吸光度计算。建立抑制 率(P％)和浓度的自然对数(1nC)的线性回归关系，并求解抑制率为50％的浓度EC，。值。 404 中国化工学会农药专业委员会第十届年会论文集 表I 供试除草剂及其分类 序号 除草剂品种 通用名 作用机制 化台物结构类型 制剂 I 精稳杀得 fiuazifor一口 ACCase 芳氧苯氧丙酸类 53％乳油 2 精禾草克 quizalofop—p 5％乳油 3 高效盖草能 haloxyfop-p 108％乳油 4 威霸 tenoxaprop 69％乳油 绿磺龌 ALSase 磺酰脲类 95％原粉 5 ehlorsulfuTOD 6 玉农乐 nicosulfuton 4％悬浮剂 7 甲磺隆 仃ibensulfuton 90％原粉 8 农美利 bispyribas-sodium 嘧啶水杨酸类 10％悬浮剂 9 施珏I补 oendimetha