金刷把中细胞毒性成分的筛选和其对HeLa细胞生长影响的研究.pdfVIP

23(增刊)，2003 61 人血管内皮细胞株ECV304来源于人脐静脉血管内皮细胞，分离细胞膜并制备细胞膜色谱柱，对大量 的中草药进行筛选，寻找对血管内皮细胞膜及膜受体有作用的活性成分，并用MTT实验进一步验证其药效。 此方法与传统方法相比，具有需样品量少，简单快速，灵敏度高，周期短等优点。 该实验以人血管内皮细胞膜色谱模型指导红毛七的分离和筛选，快速地找到红毛七中与血管内皮细胞 进一步研究红毛七的药用价值、质量控制和体内分析奠定了基础。应用细胞膜色谱模型明显缩短了天然植 物中活性物质的筛选时间，同时以不同靶细胞膜色谱模型进行筛选，可以非常方便的进行一药多筛，实现 快速的药物筛选。 金刷把中细胞毒性成分的筛选及其对HeLa细胞生长影响的研究 张博贺浪冲 (西安交通大学天然药物研究与工程中心 陕西西安 721006) fallax 金刷把(Cladonia 川等地，具有镇静、消炎、止痛的功能，主治癫痫、精神分裂、神经衰弱、头目眩晕等症，是一种陕西民 间用的中草药。近年来的研究表明，细胞膜可以作为抗癌药物的一种新型靶点，可反映出药物分子与细胞 膜及膜受体的某种作用关系，文献报道以红细胞作为研究对象的较多。据此笔者以细胞制成细胞膜色谱柱 membrane (cell stationary MTT比色法验证药理作用。 l 仪器与试药 1．1仪器 热电色谱仪器(美国)：SpectraSYSTEMP2000溶剂输送泵、SpectraSERIES 2k 色谱工作站(法国)；Hermel 州安泰公司)；倒置显微镜(XDS—IB)；BIO．RAD550型自动酶标读数仪；96孔培养板。 1．2试药甲醇、乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、二甲亚砜等均为分析纯(西安化 制) 1-3实验所用的动物及细胞株 健康家兔，雌雄不限(西安交通大学实验动物中心)；HeLa细胞株(西安交通大学免疫病理教研室馈赠) 2原药材的提取分离 并提取液，回收乙醇至无醇味，加水适量，分别以石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到JSB—l， 活性成分的部位。 2．2对乙醚部位JSB．2进一步分离 以柱层析硅胶为填料，湿法装柱并用洗脱液平衡柱，将JSB一2用硅胶拌样后上柱分离，采用氯仿／甲醇 中可能含活性成分的部位。对JSB一2A又进行柱层析分离，以正己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂，得到 为有保留部位，显示出其中可能含活性成分。 2．3 JSB．2A2的纯化 该物质有保留，显示其可能具有活性。见图2。 62 药物分析杂志 图l乙醚萃取物在红细胞CMSP柱上的色谱图 ofether on RBCCMCcolumn Chromatogramextractingpartthe Figl 图2片状结晶(G)在红细胞CMSP柱上的色谱图 ofsheet Gon CMCcolumn．．．．． crystaltheRBC Chromatogram Fi92 3结晶体G体外抗癌作用细胞毒性实验 3．1 HeLa细胞的传代培养 5％C02饱和湿度的培养箱内培养备用。 3．2 MTT比色法检测G抗肿瘤活性 u 孔200 1．t 40，20，10，5 u 5个浓度，加在96孔板内，每孔加20L，每种剂量6个平行孔。药物作用44小 g-mL‘1 时后，加入MTT20u L，微 存活率=抗癌药物组光密度植(OD)／细胞对照组光密度值(OD)×100％，抑制率=100％一存活率。 3．3 光镜形态学观察细胞进入对数生长期后，加入不同浓度药物，定时观察各组分细胞形态的变化。