纤维素酶周期刺激固态发酵探究.pdfVIP

纤维素酶周期刺激固态发酵研究 陈洪章李佐虎 (中国科学院化工冶金研究所生化工程固家重点实验室 北京 100080) 摘要本文利用汽爆麦萆作为歼堆素酶固态发酵的主要原料，不仅使滤纸酶提高了2-5倍， 而且使DGase酶活接近了FPA水平．周期刺激有利于固态发酵生产纤堆素酶．变温培养可协调产 醇茵株的生长和酶生产对温度的不同要求；变压刺激加速了产肆酋的生长，相应地缩短了发酵产 酶周期． 液体种子接种的固态发酵k直接用孢子接种的发酵产酶用期短．加太液体种子量可进一 步缩短产酶周期． 关t词纤维素酶用期刺激固态发酵 I前言 纤维素酶解转化应用的最大障碍在成本太高，据研究纤维素酶制剂的成本是纤维质原料的50 倍…。为了改进纤维紊酶解工艺，近年来主要从提蠢纤维素酶的生产效率和纤维素的酶解可及性 ■ 两方面入手。许多丝状真菌可以合成大量的胞外纤维素酶，被认为是最有希望投入实际生产的微 白质己达30～40g／L，接近或已达到高产淀粉酶的臆外蛋白质浓度，似乎已无大幅度提高的可能。 但这些工作多数是采用纯的纤维素粉、无机盐等配制而成的合成培养基，进行液态发酵。而液态 发酵存在着对培养基要求高．酶系不瞬全和易造成椭污染等问题h”，在实际进行大规模生产纤 维素酶中还有较多困难。利用廉价的原料，采用新的固态发酵技术可望有助于进一步降低纤维素 酶的生成成本。为此，我们在这方面躲讨一下可行性。 2材料与方法 decumbens 2．1菌种斜卧青霉(PenicilliumJVAI彩嘛¨由山东大学微生物研究所赵听博士提供。 原菌种移接在10％麸皮浸汁斜面上。 一 2．2实验材料汽爆麦草似】。 2．3固态产酶培养基 0．3％。 汽爆麦／麸皮(8／2)，固液比1：2．5，(NH{)2s仉1．5％，HgSO．0．6％，I(}12P04 2．4培养方法 。 在300ml三角瓶中装lOg固态产酶培养基(以风干料计)，灭菌后，接种孢子悬浮液，变温 或变压培养3～5d。 - 2．5酶活测定方法 4．8、0．2 r／min h，于4000 在固态发酵曲加入10倍的pH mol／L的乙酸缓冲液室温下，浸泡4 离心15min，取上清液测酶活。 ml的适 脱脂棉酶活(c1)测定：50+1吨脱酯棉加入I．5ml、0．2mol／L乙酸缓冲液和0．5 ml 当稀释的酶液，混匀，在5口c保温24h。反应后．加入1 DNS试剂，沸水浴煮沸5min，冷 m1，摇匀后于550 u 却，定容至25 nm下比色测0D值。酶括单位每分钟产生imol葡萄糖的酶量 353 OF1U／min．m1)。 竹为个酶活国际单位(iU／min．g min。其他同上。 滤纸酶活(FPAU)测定：50±ling的滤纸条加