体外合成MDR1+siRNA和siPORT脂质体转染siRNA至神经胶质瘤细胞系BT325实验性研究.pdfVIP

中围咚i龋监釜盟堡盐型匡!!型坌盒二二勇。昼全旦丛圭盎垒造塞堑堡 367 转导途径的活化而导致胶质瘤的恶性增殖。人IL一13Ra2跨膜蛋白由380个氨基酸残基组成，包括 341个氨基酸残基组成的胞外区和一个短的仅仅有17个氨基酸残基的胞内区。Ra】1一aH等的研究表明 另外，IL～13Rct2由f缺乏进行信号转导的能力凶此被认为是一种诱骗性受体，它与几一13高亲和力 结合而竞争性抑制IL一13‘j 断IL一4、IL—13介导的信号转导途径而导致了星形细胞瘤的恶性增殖。 质瘤患者预后的一项良好的指标，然而以往的研究均缺乏客观的依据。本研究中死亡组和未死r：组 程度上判断胶质瘤病人预后，但尚需结合病人的临床特点才能更准确地预测病人的预后。 本研究初步探讨了星形细胞瘤上II。一13R以表达的意义，相信随着对此研究的不断深入，必将为 阐明星形细胞瘤的病因、发病机制提供有力的依据，而钥对此膜受体进行免疫靶向治疗和基因治疗 也必将大大改善星形细胞瘤病人的预后。 f参考文献略) 体外合成MDRl 至神经胶质瘤细胞系BT325实验性研究 赵澎孙梅珍杨冬朴名学张亚卓 北京天坛医院 北京门J神经外科研究所(北京100050) RⅣA干扰(RNAi)是自然产生的保护基因组的机制。在过去的5年中，这一领域的研究发生了 惊人的进步。摹因沉默的潜在的分子机制为我们提供了小干扰RNAs(siRNAs)，它可以高特异性和高 效率的以任何基因为靶基因。神经胶质瘤(Glioma)是颅内最常见的肿瘤类型之一。神经胶质瘤细胞 的内在性和获得多药耐药性(muhiding 体外合成的MDRl 细胞系进行了实验性研究，希望为MDR的基因治疗提供新的策略。 材料与方法 一、材料 clontech公司产晶，其上游含有U6启动子；共转染对 V耐。r为美国BD RNAi一adypSIREN—RetroQ xP 照组pEGFP—NI由解放军总医院基础分子生物学研究室赵亚力主任惠赠；转染试剂为脂质silN)RT 一1体系为美国Anibion产品；逆转录体系为l节ennog％ript础1 368‘ 主旦医!l』逝盒地墅盐盟壁9亘量会———二酋旦全国i!蠢盘垒造塞监塑 培养基、胎牛血清为美国Hyolone公司产品；PCR T如酶购自Takam公司Ex‘raqPremi。系统；Sf·免疫 组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供；鼠抗人P—gp单克隆抗体购自美国SantaC。公司。 二、方法 nlfINA序列 1．体外sbRNA的设计与合成：根据shRNA设计原则，针对编码P—gP蛋白的MI)RI 京奥科生物技术有限公司)，对应于mRNA 3个不同的部位。每条序列包括：两端酶切位点序列 (BanrHI和EcoR T)，两条反向互补排列的19nt MDRI特异序列，中间加上loop环9个核苷酸序列U 及作为终止信号的6个胸腺嘧啶核苷。 感受态细菌的制备、质粒的扩增提取、限制性内切酶酶切，琼脂糖凝胶电泳分离，均参照文献 进行。将拦纯的质粒用全自动荧光DNA序列分析仪进行序列分析。 2．表达质粒的构建与克隆：制备感受态细胞E．coli Dtt5a，将合成的寡核苷酸与9SIREN— Re呐Qplasmid和T4连接酶混合，65。C水浴灭活10分钟。连接后的产物转化E．coli19145a，氨苄霉素 筛选后挑取自斑菌落，接种于含有氨苄霉素的LB液体培养摹中，待菌体增殖后，提取质粒，所得的 质粒DNA行电泳检测及测序分析。 胞生长状态，当