白细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选模型的建立和其抑制剂F02ZA-2554A的研究.pdfVIP

白细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选模型的建立及其抑制剂 F02ZA一2554A的研究 郑智慧“2任晓2司书毅1穆栋2路新华2崔晓兰2董悦生2张华2贺建功2 (1中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050 2华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心石家庄050015) 摘要本研究利用人源的白细胞弹性蛋白酶建立了一种快速、微量、敏感的高通量的体外筛选方法。 对筛选中得到的阳性菌株真菌F02ZA．2554进行了活性跟踪的分离纯化。该发酵液经有机溶剂提取、 硅胶柱层析、及HPLC 理化分析， 确定该化合物为已知化合物葸醌类化合物中的大黄素甲醚。 关键词炎症肺损伤 白细胞弹性蛋白酶西维来司钠大黄素甲醚 elastase 人白细胞弹性蛋白酶(human HLE)是人体中的一种主要的蛋白酶，它的直 leukocyte 接作用底物是肺、肝脏、肾脏等结缔组织中的弹性蛋白、胶原蛋白、蛋白多糖等胞外基质。体内弹 性蛋白酶酶表达过多或活性过高均可导致严重的组织损伤，并造成或加重多种肺气肿、慢性支气管 炎、脓血症、肾炎、类风湿关节炎和某些皮肤症等疾病【l刁】。日本学者研究证实了中性粒细胞弹性蛋 白酶在慢性阻塞性肺疾病(COPD)的形成中起重要作用【31另外由于弹性蛋白酶可以破坏胶原纤维及 组织基底膜层，在肿瘤的形成和肿瘤转移方面起关键作用，所以弹性蛋白酶成为抗癌新药的作用靶 点‘7·81。 inflammatory 合症(systemic response 是由严重感染、严重创伤及胰腺炎等诱发，能引起与重症炎症或局部炎症无直接关系的肺、肝脏、 肾脏等多脏器功能障碍，病情严重时造成死亡。其中中性粒细胞及其释放的弹性蛋白酶(NE)起了 重要作用。西维来司纳是一种弹性蛋白酶抑制剂，能选择性地抑制中性粒细胞释放弹性蛋白酶，改 善呼吸功能，缩短病人使用呼吸器的时间，降低安装呼吸器引起的压力性损伤及呼吸道感染症的并 发率，改善SIRS及特发性肺纤维化等引发的急性肺损伤。西维来司钠除了在肺部损伤和肺部感染上 的用途外，还用于急性胰腺炎、急性肾炎的临床治疗。2002年在我国爆发SARS时期，在治疗重症 患者的临床治疗方案中除了抗生素和激素以外，西维来司钠成为唯一获国家食品药品监督管理局 (SDA)批准的进入临床试验的抗非典药物。 蛋白糖蛋白，是一种广谱的蛋白酶抑制剂，对粒细胞弹性蛋白酶、胰蛋白酶、透明质酸酶酶等多种 酶有抑制作用，具有减少组织、细胞的损伤；改善循环、改善组织灌注；抗炎、抑制过度炎症反应。 被用于治疗急性胰腺炎、休克，在肿瘤化疗中预防肾中毒及肝、肾移植手术等临床治疗中。本研究利 133 用乌司他丁作为阳性对照，以确定筛选模型的可行性，灵敏度。利用该筛选模型从真菌发酵液中分 对FILE有中等活性。 材料与方法 1．1筛选用微生物的菌株 放线菌和真菌菌株由本室微生物菌种库提供 1．2试剂及仪器 人白细胞弹性蛋白酶(Human Elastase Leukocyte 2红外分光光度计(美国Nicolet公司)；质谱 2多标计数仪(美国PE公司)；GenesysTM (Autospec．Ultima)；核磁共振500MHz(Inova) 1．3 HLE活性测定原理及方法 变化。反应式如下： 肌E 一 多肽．Val．nitroanilide多肽+nitroanilide(405nm) lal。使用1420Victor2多标计 筛选的操作过程为：在96孔板中加入测试样品，加HLE酶液100 lal， 37C保温反应120分 数仪在410nm波长