丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化作用地研究.pdfVIP

丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化作用的研究 万崎章晓联+陈新文 武汉大学基础医学院免疫学系，430071 CVirusl HCV)糖蛋自E2的N一糖基化位点定 摘要目的：构建丙型肝炎病毒(Hepatitis DNA 点突变体。方法采用高保真性的Pfx polymerase-设计两对引物，分别引入两个突变位 C 点，通过P R体外定点突变，使E2第535、583位棱苷酸由A突变为T．从而使AAC编码的 天冬酰氨(挑n一)突变为TAC编码的酪氨酸(一Tyr一)，使得N一糖苷化位点一NNT一，一NS卜 突变为YNT，YST。结果：得到两个单位点以及一个双位点突变体，并将突变型E2连接到真 E2糖蛋白糖基化位点定点 核表达载体pCDNA3．1(一)／Myc-HisB上。结论：成功获得3个HCV 突变体，为进一步进行HCVE2糖蛋白糖基化位点与分子伴侣之间的相互关系以及突变体对 机体的免疫琦能的影响的研究奠定了基础。 关键词HCV；E2；N-糖基化位点：突变体 ofthethree mutantsof Construction site—specific N-glycosylation HCVE2 glycoprotein Wail，Xiao～Lian Qi zhang*． China ofMedicine，WuhanUniversity，430071，P-Rt ofImmunology，Coflege Depa．rmaent ofHCVE2． three mutants AbstractAim：ToconstructN-glycosylationsite—specific andfoup were Methods：PfxDNA wereused oligonucleotide polymerase synthetic primers onedouble mutation theuseofPCR and designed．By method，twosingle N-glycosylation were codon wereobtained．Inthese sites．Asn—X-Thr／Ser．Asnencoding N-glycosylation