槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验探究.pdfVIP

第五届全国免疫学术会议论文汇编 由于Treg在肠道的免疫稳定中的重要作用，中药作用于Treg影响肠道免疫而发挥治疗作用的研究已 有初步探讨。如，有实验证明，黄芪和丹参可能通过调节性T淋巴细胞的分化平衡来发挥其治疗作用， 可作为溃疡性结肠炎组方的首选中药：腹腔注射氧化苦参碱能明显提高DNFB诱发的ACD模型小鼠外 mRNA的 周血中Treg细胞的数量：苦豆子总碱对TNBS／乙醇法造模的实验性结肠炎大鼠中表达Foxp3 Treg减少和功能降低有改善作用。 综上所述，Treg细胞及其功能的发现为免疫相关疾病的临床治疗提供了新的靶点，为药物筛选、 药理机制研究提供了新的思路，其分化发育、功能及与疾病的关系研究芷不断深入，药物对Treg细胞 的影响也开始受到研究者的重视。研究中药对调节性T细胞的作用，不仅可以治疗临床上的疾病，尤其 是自身免疫性疾病，还能够扩大中医药的治疗范围，拓宽I临床应用中医药的途径，更能为揭示中医药 的作用机制提供一个新思路和新方法。 槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究 钱柳··，胡朝英，黄秋愉，程伟志，余奇文，张继英，张冬青 上海交通大学医学院，上海市免疫学研究所，200025上海 陈雪华¨·上海交通大学医学院，瑞金医院消化外科研究所200025上海 槲寄生(Mistletoe)是一种半寄生植物。被中医用于治疗淋病、梅毒、高血压和风湿病已有悠久 Lectin，ML)多年来一直被用作肿瘤的辅助治疗药物【l】。近 历史。在欧洲，槲寄生凝集素(Mistletoe 来的研究发现，从槲寄生提取物中可分离获得三个凝集素亚单位，分别被称为：ML·I,ML41，ML-III， 它们均属Ⅱ型核糖体灭活蛋自家族。ML4能和半乳糖苷结合，由两条A链和两条B链通过二硫键连接而 成：B链和半乳糖结合，A链具有对28SrRNA的_N端糖苷酶的活性，因此能阻断核糖体蛋白的生物合成。 发现MLs能直接诱导肿瘤细胞凋亡，然而对于中国产的槲寄生的生物学作用还知之甚少，本文基于前 期研究基础14-5】进一步分析从中药槲寄生中制备的槲寄生凝集素蛋白(MLP)诱导肿瘤细胞凋亡的可能 能的抗肿瘤研究和临床应用前景。 材料和方法 1．1材料 C (Histiolyti 康志愿者。 PBS、0．4％台盼蓝染液、完全培养基RPMI 1．2方法 1．2．1 MLP的提取、纯化与鉴定(简略)：采自中国四川的槲寄生碾碎用甲醇／水(1：l，v～)抽提， 过滤浓缩，液相分别用环己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯抽提。续加乙醇离心收集沉淀，制成槲寄生粗提 219 中国免疫学会中医药免疫分会 pH7．4 et．a1．2007；ABBS)。 参考文献(4)GongFang —16h后，取一滴置于载片上，盖以滴加O．4％台盼蓝染液的盖玻片，在高倍镜下数200个淋巴细胞， 算出其中活细胞的百分数。 1．2．3 X 10分钟，弃上清，悬浮细胞细胞 106)，，加10％HT染液10“l，376C避光15分钟，离心1000rpm 涂片，荧光显微镜镜检凋亡细胞数(主要观察细胞核和细胞质内的浓染致密颗粒及典型的凋亡小体， 每份标本至少记数100--200个细胞)，·按下列公式计数凋亡细胞百分比。凋亡细胞百分比=凋亡细胞 数／(凋亡细胞总数+未凋亡细胞总数)x100％ 1．2．4 1640培养基洗三遍。按5 6．25ng／ml几个剂量组和PBS对照组，然后取对数生长期的HL·60用RPMI ×104细胞／ml悬于RPMI1640完全培养基中，每个浓度设3个复孔，50m搿L，加入96孔培养板置37 ℃，5％C02孵育24h，加入MTT DMSO振荡10ram，使兰色结晶物充分溶解)，加入10％SDS1009F孔，置于37℃待其完全溶解后， 对照(OD)】×100％ 1．2．