PMS肝气郁证模型大鼠含药血清对大鼠海马神经元MOR表达影响.pdfVIP

PMS肝气郁证模型大鼠含药血清对大鼠海马神经元MOR表达的影响 孙鹏’ 魏盛2 (1lLJ东中医药大学药学院2llI东中医药大学实验中心 山东济南250355) 【摘要】目的：观察PMs肝气郁证模型大鼠含药血清对大鼠海马神经元MOR表达的影响。方法： l采用束缚造模法制备PMS肝气郁证大鼠模型，结合中药血清药理学方法，以含药血清对新生大鼠 果：大鼠造模行为学评价结果显示，与空白组大鼠相比，PMS肝气郁证模型组大鼠呈显著性差异 (P0．01)；westem blot结果显示，与正常组相比，PMS肝气郁模型组中，MoR蛋白表达水平显著 升高(p0．01)。结论：采用束缚法可成功制备PMS肝气郁证大鼠模型，旷场试验可有效评价该模 型；大鼠海马神经元中MOR含量变化，显示其与PMS肝气郁证发病机制密切相关，可能为PMS 肝气郁证发病机制之一。 经前期综合征(PMS)是指发生在经前，严重影响妇女日常生活和工作，涉及到身体、精神和行为 三方面的症候群，其特点为黄体期出现症状，月经来潮后症状自行消失【¨。PMs肝气郁证【21是PMs 的主要证型之一，是肝疏泄不及而产生的以气机郁滞为特点的证候，调肝方药舒郁胶囊可显著改善 PMS肝气郁证临床表现Ⅲ。 对PMS发病机制的研究目前尚不明确，大量研究表明【4l，PMS模型大鼠中枢系统中去甲肾上腺 源性阿片物质及其受体也与PMS发病机制有密切关系。内源性阿片肽具有细胞间信使作用，能够发 挥抑制5．HT等致焦虑神经递质释放的作用【61。动物实验研究发现【7l，PMS肝气逆证大鼠血清中内吗 啡肽含量显著升高，这也说明了内源性阿片物质及其受体参与情绪的调节。 目前发现的4类阿片受体中“阿片受体(MOR)是其中之一，在体内参与介导镇痛、耐受、药物 成瘾、免疫及隋绪调控等多种生理活动f8】。Lu亿等研究表明【9】，MOR参与调控抑郁、消极、低沉等情绪 反应，通过调节神经递质的释放发挥重要作用，MOR拮抗剂经实验研究有抗抑郁作用。课题组前期研 究显示【10l，MOR在PMS肝气逆证大鼠顶叶皮质和额叶皮质中表达下降，在下丘脑和海马表达升高。 本研究建立大鼠海马神经元离体细胞模型，结合中药血清药理学的研究方法，采用含药血清对 细胞进行干预，在细胞波形上进一步验证MoR在PMS肝气郁证中的发病机制。 l材料与方法 I．1实验动物 提供， SCXK(京)2002．0003。 Wistar大鼠(出生24h内)，IlI东中医药大学实验动物中心提供，SCXK(鲁 1．2药品与试剂 1169)： 舒郁胶囊，由白芍、柴胡、香附、甘草组成(新药临床批件号2008Ll 盐酸纳洛酮注射液(北京凯因科技股份有限公司，批号。 anti—mouse 生物科技有限公司，sB一200)：goat IgG一}【RP(Santacruz，sc一2005)。 1．3实验仪器 2实验方法 2．1含药血清制备 2．1．1实验动物筛选 Wistar大鼠抵达后适应一周，将大鼠饲养于昼夜颠倒的环境，每曰于20：00开灯，8：00关灯。 期间自由饮食饮水，每天早晚打扫卫生，并用新洁尔灭和84消毒液交替进行消毒，一周后开展实验。 2．1．1。1 阴道涂片镜检【111 大鼠的动情周期可分为接受期和非接受期。接受期包括动情前期和动情期两个阶段，大约持续 ～天左右；而非接受期包括动情后期和动情间期两个阶段，大约持续两天左右。本实验需筛选出动 情周期规则且处于非接受期阶段的Wistar大鼠进入实验。 表1 大鼠动情周期各阶段细胞形态变化 2．1．1．2旷场实验【12J 在造模开始前和结束后，每只大鼠各进行一次实验，在相同的时间进行实验，比较各组得分差 异。三位观察者进行行为评定，最终得分为三位观察者评分的平均值。 2．1．2动物造模及给药方法 筛选出处于动情周期非接受期的大鼠32只进入实验。依据大鼠旷场实验总得分和体重将32只 大鼠随机分为4组，每组8只。 1)空白组：大鼠给予灭菌饮用水(1抛比009体质量)，1次／d，