DKK1-siRNA真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究.pdfVIP

垦量重堕丝盘查 !生 筮 鲞第2期 ChinJOsteoporos，February2015，Vo121，No．2 Publishedonlinewww．wanfangdate．coin．cn doi：10．3969／i．issn．1006．7108．2015．02．001 125 · 论 著 · DKK1一siRNA真核表达载体 的构建及其对骨质疏松大 鼠治疗作用的研究 刘媛 剧锦哲 张伟 庞春艳 武剑 吕凤凤 王永福 包头医学院第一附属医院风湿免疫科 ，内蒙古包头 014010 中图分类号 ：R593．9 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—7108(2015)02—0125~8 摘要 ：目的 针对 DKK1基 因构建两段小干扰 RNA(siRNA)真核表达载体 ，观察其对骨质疏松 (OP)大 鼠的治疗作用 。方法 12周龄 Wistar雌性大 鼠随机分为5组 ，对照组、模型组、空载体组、DKK1．siRNA1组及 DKK1．siRNA2组，每组 10只。对照组肌 注生理盐水，其他组肌注地塞米松造模，连续 12w，鉴定骨质疏松模型是否构建成功。构建两段 DKK1一siRNA真核表达载体， 尾静脉注射治疗组大 鼠，对照组和模型组注射等体积PBS，空载体组注射等体积空载体。骨切片观察载体是否靶向到骨，RT． PCR检测股骨 DKK1mRNA的表达 ，免疫组化法检测股骨 DKK1蛋 白的表达水平 。ELISA检测血清 中骨碱性磷酸酶(BALP)、 I型胶原蛋白(Col-I)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)的水平 ；测定股骨骨密度及病理结构变化 。结果 (1)双酶切和基 因 测序鉴定结果表明siRNA真核表达载体构建成功；(2)模型组 、空载体组及治疗组大 鼠造模后 ，近端股骨骨密度较对照组明显 降低 (P0．05)；病理改变为骨小梁数 目明显减少、断裂 ，而对照组骨小梁结构较完整 ；(3)DKK1．siRNA质粒载体靶 向到骨 ； (4)治疗组大 鼠血DKK1一mRNA及股骨DKK1蛋 白的表达明显下降；(5)与模型组和空载体组相 比，治疗组血清中BALP与 Col—I水平明显升高，TRAP水平明显下降 (P0．05)；(6)治疗后各组大 鼠近端股骨骨密度的差异无统计学意义 (P 0．05)；(7)治疗组大 鼠股骨有新生骨小梁形成 ，骨小梁破坏减轻。结论 DKK1一siRNA促进骨形成 ，抑制骨吸收，减轻骨结构 的破坏。 关键词 ：DKKI基 因；小干扰 RNA；骨质疏松症 Construction of DKK1-siRNA eukaryotic expression vectors and the therapeutic effect on osteoporoticrats LIU Yuan，JU Jinzhe，ZHANG W ei，PANG Chunyan，W U Jian，LV Fengfeng，WANG Yongfu DepartmentofRheumatology，theFirstAffiliatedHospitalofBaotouM edicalCollege，Baotou014010，China Correspondingauthor：WANG Yongfu，Email：wyf5168@ hotmail．com Abstract：Objective ToconstructtwovectorsexpressingsiRNAtragetingDKK1geneandtoinvestigatethetreatmenteffecton ratosteoporosis(OP)．Methods Twelve—week—oldOPratswererandomlydividedinto5groups，includingcontrolgroup，model group，emptyvectorgroup，DKK1一siRNA1group，andDKK1一siRNA2 group，with 10ratsin each group．Ratsin latter4 groups weregivendexamethasonefor12weekscontinuously，butratsincontrolgroupwereinjectednormalsaline．Themodelof osteoporosiswaside