聚合物色谱柱用于胸腺5肽的分离的研究.pdfVIP

聚合物色谱柱用于胸腺5肤的分离研究 魏荣卿，陈永森。姚忠，刘晓宁’， (南京工业大学制药与生命科学学院，南京210009) 摘要:采用聚合物反相色谱柱 (MKF-RP一色谱柱)分离胸腺5肤，并与C18硅胶色谱柱进行 了比较。结果表明:聚合物色谱柱柱压低，有机相用量少，水耐受性好，分离柱效高。 关键词:聚合物反相色谱柱;MKF-RP一色谱柱;胸腺5肤 胸腺((Thymus)是免疫系统中重要的中枢免疫器官，可分泌数十种胸腺激素以调节其免 疫功能。胸腺激素 (thymushormone,TH)包括:胸腺素 (Thymosin)，如胸腺素a1 (28 肤)、胸腺素04(43肤)，胸腺体液因子((THF),如THFY2(8肤)，血清胸腺因子Thymulin (FTS,9肤)及胸腺生成素((Thymopoietin,TP)，如TP-11等Ill。从人胸腺组织中分离出的 胸腺生成素 (TP-11)含49个氨基酸，是一相对分子质量为5562的单一多肤化合物I.TP-11 的32一36位氨基酸是TP的重要功能活性部分。胸腺五肤(TP-5)是人工合成的五肤 (Arg-Lys-Asp-Val-Tyr)物质，与TP-11的32-36位氨基酸残基片段一样并具有与TP-11相同 的生物活性3][。 TP-5的生物学活性主要表现为:对T淋巴细胞的分化、发育、成熟及增值有一定的促进 和调节作用，能提高机体的免疫功能，对大剂量Y射线照射，有一定的抗辐射作用，对肿瘤 化疗、放疗以及其他原因所致的免疫功能低下，均具有明显的治疗作用，与化疗联合应用，可 以预防化疗药物所致的免疫功能低下，及抗肿瘤生长的作用【，‘’〕。此外，还能显著地抑制机 体内脂质过氧化物的产生，延缓动物机体的衰老[63，治疗慢性乙型肝炎7[’〕、重型病毒性肝 炎M，佐治儿童病毒性脑炎[Iol，能明显恢复、提高、改善严重烧伤患者T淋巴细胞免疫调节 作用，促进NK细胞的活性，减少伤后感染及其它并发症的发生率P(,7等等，在临床上用途很 大。 但人工合成的TP-5产物常因短肤、错肤及脱落的氨基酸保护基等副产物使成分比较复 杂，需要分析及分离纯化，才能表征和得到高纯度的目标产物。检测胸腺肤的方法可采用免 疫分析法、紫外分光光度法、高效毛细管电泳法、高效液相色谱(HPLC法等，反相高效液相 色谱(RP-HPLC具有分离效果好、分辨率高、回收率高的特点，因此是目前分析、分离纯化 和制备多肚的主要手段u[。通常色谱柱多为硅胶基质的C18柱[2.iz-isl，由于硅胶基质的色谱 填料不耐酸碱，在酸碱条件下使用受限，也不能用酸碱清洗再生。此外，使用后需耗费大量 有机溶剂置换水相，才可存放，操作麻烦，既提高了成本，又增加了污染。为此，本文使用 聚合物基质的色谱填料 (聚苯乙烯型)进行TP-5的分析研究。 1实验部分 1.1材料与试剂样品:TP5纯品 (S工GMA公司);TP5粗品，由作者所在学院TP5课题组提 供，纯度为60.25(质量分数，下同);流动相:磷酸缓冲液 (0.GIM,px=7.0):甲醉二(100-x) x,(x=5,10,15); 1.2 仪器:高压液相色谱仪 (COULTER，美国BECKMAN公司);聚合物色谱柱: MKF-RP-254605,MKF-RP-254610,MKF-RP-154605(南京麦科菲高效分离载体有限公司);C18 色谱柱:Kromasil,250X4.6mmI.D,61,:甲醇为色谱纯，(Merck公司); 1.3色谱条件:流速=Iml/min，检测波长=275nm，进样量20u1, 2结果讨论 图1,2比较了硅胶基质和聚合物基质的色谱柱对TP5纯品的分离效果。由图可见，聚 合物色谱柱:MKF-RP-254610具有更好的柱效，且出峰时间早。 312 目 ﹄ 牛 姗 叨 一 naKn-I+r-am}a 荆 Kmmmx...- X户笼5 X- 15 叨 粼