鸡nestin阳性祖细胞的生物学特性的研究.pdfVIP

on GeneticMarkers 8 ofthe13”National Animal Proceeding Symposium 鸡nestin阳性祖细胞的生物学特性研究 白春雨“2，张明海2，关伟军H，马月辉“2+ (1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193； 2东北林业大学，哈尔滨150040) 引言 糖尿病是一种以糖代谢异常为主要特征的内分泌代谢性疾病，现代医学认为根治糖 尿病，只有通过胰腺或胰岛移植才能使病人完全康复，无论是I型还是II型糖尿病，应 用细胞移植治疗的主要障碍之一是能产生胰岛素的组织来源极其困难。研究证明在胰腺 中存在胰腺干细胞，在胰腺组织受到损伤或药物刺激时，增殖分化为分泌激素的各种胰 腺细胞类型。本研究尝试分离北京油鸡胚胎胰腺干细胞，用胰腺十二指肠同源盒 胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供理论和实践基础。 材料与方法 无菌分离15日龄北京油鸡胚胎的胰腺组织，置于预冷的I-IBSS中冲洗并于解剖显微镜 P，于37℃振 下去除周围的脂肪和结缔组织后剪为lmm3左右的组织块，加入Collagenase 荡消化15min，终止消化后过200目筛网，收集细胞，按每孔2x105个细胞接种于6孔 1540+10％FBS，1 l,t 板，加入培养液(advanced mmol／L丙酮酸钠，71．5mol／L13一巯基 乙醇， EGF、20 bFGF)，置于37℃，5％C02，饱和湿度培养箱中培 20ng／mL ng／mL 养。待细胞生长至80％融合时，以0．125％胰蛋白酶消化传代，每3d换液1次，将传代后的 细胞至于含10mmol／L尼克酰胺的培养基中定向诱导为胰岛素分泌细胞。使用免疫组化及 耐量试验检测和钙离子变化检测。 结果 分泌细胞分化后，PDX一1表达消失；糖耐量实验显示高糖刺激胰岛素分泌细胞后， insulin表达量显著增加；钙离子动态监测显示，经过Flou-4动态检测可以观察到在高糖培 养基加入后，细胞内钙离子浓度显著增加。 讨论 本研究使用鸡为研究材料，从鸡胚胎胰腺中成功分离了nestin阳性细胞，方法上与哺 乳动物分离nestin阳性细胞区别在于差速时间上的差异，禽类细胞的贴壁速度与生长速度 普遍高于哺乳动物。鸡nestin阳性细胞在尼克酰胺长时间诱导下，可分化为胰岛素分泌细 胞，主要区别在PDX一1基因的消失；分化后的nestin阳性细胞具有胰岛素分泌功能，可以 在不同浓度葡萄糖下分泌不同量的胰岛素，钙离子动态检测也证实本研究诱导获得胰岛 素分泌细胞具有生理功能，为糖尿病的细胞治疗提供新的生物材料与理论基础。 关键词：鸡：胰腺；干细胞；生物学特性 2011ZX08012—002—06)和国家家养动物种质资源平台项目(2012)资助。 木通讯作者：关伟军，男，1966年生，教授，博导，E-mail：weijunguan301@gmail．com： ma@hotmail．tom。 马月辉，男，1964年生，研究员，博导，E-mail：yuehui