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依博素生物合成基因Ste7和Ste10的功能研究
白利平李元
(中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所，北京100050)
滞剂筛选模型，筛选到链霉菌菌株139，它能够分泌一种新的胞外多糖(EPS)依博素。药
效学研究证明，依博素对类风湿性关节炎有明显疗效，并且毒性较低，目前已申报临床研
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究，有可能发展为一种新型的临床药物。我室首次从链霉菌139中克隆了大小为32kb3232
Ste22：)的依博素生物合成基因簇。为了通过组合生物学研究依博素结构与生物活性关系并
获得新型依博素衍生物，拟对不同开放阅读框(ORF)的功能进行深入研究。本文选择了
Ste7和Stel0基因为研究对象。
方法研究采用基因同源双交换获得基因缺失株，在此基础上研究该基因在依博素生物
合成中的功能。
性筛选，得到KillvAms的Ste7基因缺失株，通过Southem杂交以验证所获菌株。
法获得Stel0基因缺失株。
表达载体pET一30a，得到重组质粒pET一30a—Ste
素变性、复性、Ni2+一螯合亲合柱纯化并进行酶学反应确证，同时进行相关的酶学参数
(Km值、最适pH、最适温度)分析。
的原生质体，获得Ste7基因遗传互补株。通过与构建Ste7基因遗传互补株相同的方法获得
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S抛10基因遗传互补株。分别对阻断菌株和它的遗传互补株发酵，进行胞外多糖分离纯化，
对该多糖进行单糖组分和生物活性分析，并与阻断株的发酵产物进行比较，分析菌株在阻
断、互补后所发生的变化。
单糖的组分分析正在进行中。经尿素变性、复性、Ni“一螯合亲合柱纯化得到了Stel0基因
表达的蛋白，酶学反应确证和相关的酶学参数分析正在进行中。
结论Ste7基因编码糖基转移酶，在依博素的生物合成中，参与了糖基转移至多糖重复
单元增长链的过程；Stel0基因编码天冬酰胺合成酶，在依博素生物合成中起修饰作用。
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