神经细胞损伤与保护的研究.pdfVIP

大会特邀发言 大会特邀发言 冯凯孟晓梅谢琰臣刘江红矫毓娟王虹许贤豪 神经细胞的选择 ·元代细胞培养。 ·sH_sY5Y细胞来源于人神经母细胞瘤，是分化程度较低的神经细胞肿瘤，其细胞形态与正常神经元相似，呈锥 体状，且具明显轴突。该细胞繁殖较快，但其生理和生化功能与正常神经细胞相似(陈文东等2000：206)。 药物选择 ·神经节苷脂是含唾液酸的糖神经鞘脂类，是神经细胞膜的组成成分，在神经系统中含量尤其丰富，GMl为最 重要·的神经节苷脂之一。 ·GMl具有保护细胞膜、促进神经生长、恢复神经功能等作用。但确切机制尚不清楚(毛捷2004：909)。 ·研究GMl神经保护作用的机制。 神经损伤常用的方法和途径 ·兴奋性氨基酸。 ·氧自由基。 ·钙离子超载。 ·B—Amyloid。 兴奋性氨基奠损伤方法 ·将上述解冻细胞移植到96孔培养板中，待细胞生长状态良好时加入含不同浓度谷氨酸和甘氨酸的D肛M培养 u 液，1001／孔，致不同程度的兴奋性氨基酸损伤。 观察细胞掼伤的常用方法 ·细胞形态学观察。 ·酶测定法。 tetrazo]ium。 ·MTT法测定细胞存活率MTT=Ⅲethylthiaz01 萄栩神经保护作用 ·是否有效(对照)。 ·量效(不同剂量)。 ·时效(损伤不同时间点加入)。 2005年北京地区神经内科学术年会论文汇编 本研究的限定性目的 ·探讨GM一1对体外培养人神经母细胞瘤SH—SYSY细胞。 ·兴奋性氨基酸毒性损伤的。 ·保护作用。 限定性目的的具体化 ·以神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系为材料。 ·用M订法测定细胞存活率。 ·研究在神经细胞损伤不同时点、不同剂量G肛1对上述损伤的保护及治疗作用。 损伤实验条件的摸索 II DMEM培养液100I／孔，37℃，5％C02温箱中作用细胞0．5h 造成谷氨酸和甘氨酸损伤细胞模型，按损伤时间长短分三组(损伤后3h、12h、和18h组，) u 结果：250umol·L-iGlu和25 mol·L-IGly作用3小时对细胞损伤比较适合实验研究 实验分组 ·损伤否：空白对照组(只加培养细胞)、损伤组(只给损伤)。 1．t ·损伤后给GM—I：低浓度(损伤后给予lO u mol／L)和高浓度(100 mol／L，由精优惠南医药有限公司提供)。 ·作用时间：6小时、12／J时、24]J、时，每组各设8孔。 MTT法 ·根据细胞代谢括动与活细胞数直接成比例的原理，通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细 胞的死亡。 接与活细胞数有关。 细胞计数及形态学观察 ·倒置相差显微镜下观察细胞形态： 一损伤组与对照组相比，圆形及漂浮细胞较多，细胞折光性差，边缘不整，轴突伸展差，细胞成簇明显。 一经谷氨酸甘氨酸损伤后，(孙I-I保护组与非保护组相比，细胞形态明显改善，主要表现为细胞贴壁良好，晖形及 漂浮细胞较少．轴突伸展，细胞成簇现象明显减少。 细胞增殖率测定GM-1组为优(见囊1) 一2一 太会特邀发言 表1：GM一1对兴奋性氨基酸毒性损伤SH—SYSY细胞的MTT代谢率的影响(x±S) 说明：#与对照组相比；}与损伤组相比 G_一1作用(高浓度组优于低浓度组)(见衰2) 浓度组。