小单孢菌FIM-203产生庆大霉素A地研究.pdfVIP

I 小单孢菌FM-203产生庆大霉素A的研究 郑卫魏天恩程振泰谢阳程元荣 (福建省微生物研究所福州350007) 摘要从福建武夷山森林土壤中分离到一株小单孢菌，编号为FIM．203，分类特征的初步研究表明 该菌株属于棘孢小单孢菌。生物活性检测提示FIM一203的发酵液具有抗G+、G一细菌活性，发酵液 经离子交换树脂提取获得的初提物含有三个组分，其中FW-203C为主要组分。理化性质和光谱学分 A)同质。 析研究证明FW-203C与庆大霉素A(gentamicin 关键词 棘孢小单孢菌氨基糖苷类抗生素庆大霉素A 在筛选小单孢菌来源的有生物活性的次级代谢产物过程中，分离到一株来自福建武夷山森林土 壤的小单孢菌FfM．203。生物活性研究发现其发酵液中有抗细菌活性成分，薄板层析结果表明 为主要组分，经理化性质和光谱分析研究证明与庆大霉素A同质。本文报道FIM．203的菌种鉴别、 发酵、提取纯化及抗生素FW-203C的理化性质、光谱分析和抗菌活性研究。 1．材料与方法 1．1菌种 菌株F11VI．203分离自福建省武夷山森林土壤 1．2形态观察 进行透射电镜观察。 1．3培养特征及生理生化特性 观察。 碳源利用采用无碳的高氏1号琼脂为基础，分别加入1．6％不同碳源的培养基，35C培养，于不 同的时间观察生长情况。 1．4细胞壁化学组分的分析 参照王平‘1l的方法进行。 1．5发酵 种子培养： O．59：K2HP04·3H20：0．59：NaCh 7．5。 189 hr。 转式摇瓶机(240r／min)32。C培养72-～76 发酵： 发酵培养基：可溶性淀粉：40．09；葡萄糖：5．09；蛋白胨(503型)：5．Og； 7．5～7．8。 pH 发酵培养基分装于三角瓶中，121℃灭菌O．5hr，将培养好的种子以5～10％的接种量接入发酵培 养基．置旋转式摇瓶机(240r／min)32。C培养110～120hr。 1．6活性产物的提取、分离纯化和组分测定 提取：发酵液用6N硫酸调pH至3，静置半小时后离心，弃除菌丝渣。离心清液用浓氨水调pH 活性，合并活性组分，60℃减压浓缩。 水洗脱，分段收集，硅胶薄板检测洗脱液的活性组分，合并含FW-203C组分的洗脱液，浓缩液用 6N硫酸调pH至5．5后，用甲醇沉淀，得FW-203C硫酸盐。 活性组分检测：用高效硅胶薄板层析法检测活性组分，以丙酮：甲醇(3：1)为展层剂，层析后的薄 板用枯草杆菌ATCC6633进行生物显影。 1．7抗菌活性测定 采用液体二倍稀释法，在96孔板上进行。细菌采用肉汤液体培养基，37。C培养过夜，分枝杆菌 采用甘油肉汤培养基，28℃培养；真菌采用沙氏培养基，28。C培养；细菌酵母培养24hr，分枝杆菌 和丝状真菌培养48hr后观察结果。 2结果和讨论 2．1菌种 形态特征：在各种条件下FIM一203均不产生气生菌丝体。在合适的培养条件下，基内菌丝体发 育良好，菌丝体分枝，长时间培养后会产生断裂，单个孢子着生于基内菌丝体的主轴及分枝上，菌 壁大部分棘状凸起，少数孢子光滑(图2)。 图1菌丝形态(x1000) 图2孢子形态(x10000) 培养特征、生理特性及碳源利用： 菌株FIM203在各种培养基上均不产生气生菌丝体，在所采用的各种有机培养基上基丝生长差， 190 孢子层薄；在无机培养基上生长较好，其颜色为棕色一紫黑色系列，孢子层黑色，无可溶性色素； 在马铃薯块上不生长，在加碳酸钙的马铃薯块上生长良好。 菌株FIM203水解淀粉，硝酸盐还原阳性，牛奶凝固、胨化，明胶不液化，在ISP6L3产生 H2S，在ISe7上不产生黑色素，不水解纤维素。 一果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、纤维二糖、L一鼠李糖、海藻糖、淀粉、醋酸钠；不利用D一阿拉伯 糖、核糖、山梨糖、D(+)一蜜二糖、棉子糖、菊糖；对D一松三糖、肌醇、甘油、山梨醇利用可疑。 细胞壁化学组分及全细胞糖： 细胞糖为D型，