脲梯度排阻色谱复性E.coli表达的rhG-CSF.pdfVIP

B50脲梯度排阻色谱复性Ecoli表达的rhG．CSF 王超展王骊丽耿信笃 西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室西安710069 排阻色谱(SEC)，又称凝胶过滤色谱(GFC)是目前研究最多的用液相色谱对蛋白进行复性 和牛血清白蛋白(13SA)进行了复性并同时进行了分离，虽然当时并不认为用SEC能对这三种蛋 进行了较为详细的研究”】。与常用的稀释复性法相比，SEC复性具有很多优点，已有专门论述 SEC复性的综述文章发表”J。目前这一方法已用于多种蛋白质的复性，效果较好。在普通的 SEC复性中，变性剂浓度变化突然，这使得复性过程中因变性蛋白分子聚集而损失的蛋白较 多。谷振宇等”1提出了脲梯度SEC复性法，在复性过程中脲浓度是线性降低的，因此更有利 于变性蛋白的复性。前文用不含脲梯度的SEC对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)进行了 复性”J，本文在此基础上采用脲梯度SEC对rhG．CSF进行了复性，研究了脲梯度的长度、脲 梯度中的最终脲浓度以及进样体积对复性过程的影响，并比较了脲梯度SEC和普通SEC对 rhG．CSF的复性效率。 m01．L～～2．0 梯度(从8．0 梯度下移，其周围的变性剂浓度逐渐地降低，在此过程中rhG．CSF逐步进行折叠。因此采用 这种方式实现了线性降低脲浓度。图l中的电导曲线表示在洗脱rhG-CSF过程中脲浓度的梯 度变化。因为脲是一种非电解质，所以含高浓度脲的缓冲液具有低的电导。图l中电导曲线 的线性降低说明脲浓度的线性增加。从图1中看出，在复性的rhG—CSF之前有一个小的色谱 峰，通过电泳检测它是rhG．CSF的聚集体。这个结果说明虽然在脲梯度SEC中脲浓度的降低 是很缓慢的，但是在rhG—CSF复性的过程中仍然会形成少量的聚集体。 4 2 ：：s 8 一 、 p 一 O 啪 i | 踟 6 8 ；：i ． 讥 ^∞Ⅲ，fl_ 6 30§ m ^ 栌 ㈣ 4 『＼， 4 蚴 ㈣ ^。『I×)奇_占u日。u13∞鲁 2 ；：i 型Ⅺ Ⅲ 2 00 2 4 60 一 畸托d。n i 暑县S鼍目目u口ou日}j 乜 final concentrationofta-ea(mo㈦ 图1腺梯度SEC复性rhG-CSF的色谱圈 圉2最终腮浓度对腮梯度SEC复性rhG．CSF的髟响 8 0mmol·121 A{馥：0．10toolL‘Tris(pa0)，1 EDTA，0．15 除脲梯度中的最终脲浓度外．其余色潜条件同图l。 molL-1NaCI．2．5mmolL‘GSH，0．8mmolL‘GSSG。B液：A i茛+8．0tool—151脲。流速：2．0mLrain～。脲梯度：10mL．2．0 ◆表示比活性．▲表示质量回收率。 mol∥脲(25％B)一8．0mol∥脲(L00％B)。进样量：200儿工。． 3 蛋白浓度为2 mgmul。+表示复性的rhG．CSF。 100 本研究对脲梯度的长度进行了选择，以期能够使rhG．CSF在脲梯度中的低浓度(即2．0