茭草ISSR-PCR体系的优化.pdfVIP

中国患亏通报 2015，31(6)：136—141 ChineseAgriculturalScienceBulletin 茭草ISSR—PCR体系的优化 仇玉萍 ，吕玉凤 (国家高原湿地研究中心／西南林业大学，昆明650224) 摘 要：为了建立适用于茭草的ISSR．PCR反应体系，以湿地植物茭草基因组DNA为研究对象，筛选引 物为UBC818，采用正交试验设计方法，建立了茭草ISSR—PCR反应体系和扩增程序。结果表明，在 25 反应体系中含有 1~PCR缓冲液、250tmaol／LdNTP、2．0mmo1／LMgC1：、0．5txrnolL／引物、1．0UTaq DNA聚合酶和 100ng模板DNA最适用于茭草 ISSR—PCR扩增。适宜的扩增程序为94cc5min；94cI二 1rain；56℃45S；72℃90S；35个循环 ；72℃ 10min；4cI=保存 。 关键词：茭草；ISSR；正交设计 ；反应体系 中图分类号 ：Q949 文献标志码 ：A 论文编号 ：2014．2391 OptimizationofISSR—PCRSystemofZizanialatifolia QiuYuping，LvYufeng (NationalPlateauWetlandResearchCenter~SouthwestForestryUniversity，Kunming650224) Abstract：InordertoestablishasuitableISSR—PCRreactionsystemforZizanialatfiolia，thewetlandsplant ZizanialatfioliagenomicDNAwasoptimizedwithchoosingtheprimerUBC818．Weusedtheorthogonal designtoestablishanISSR—PCRreactionsystemandamplificationprogram．Theresultsindicatedthat25 L reactionsystem containinglxPCR buffer，250p．mol／LdNTP，2．0mmol／LMgC12，0．5Ixmol／Lprimer，1U Taq DNApolymeraseand 100ngtemplateDNAwassuitabletoISSR—PCRamplifying．Amplificationprogram as followed：pre—denaturation at94~C ofr5min，denaturrtionat94~C f0rlmin，annealingat56~C for45S， extendingat72℃for90S，after35cycles，thenextendingagainat72℃ofr10minandkeepingat4℃． Keywords：Zizanialatifolia；ISSR；orthogonaloptimization；reactionsystem 0 引言 功能 】【。]。另外，茭草也是能为水稻种质改 良提供优质 茭草(Zizanialatifolia)，又称菰、野生稻，为须根性 基因的理想野生植物 ，它具有很多水稻不具备优 良特 多年生沼泽植物 ，属禾本科，稻亚科 ，稻族 ，菰亚族菰 性，如抗病性强，几乎不感染稻瘟病、白叶枯病等；具有 属 。中国的茭草资源非常丰富，在各地湖泊、池塘、水 分蘖力强，灌浆成熟快、耐深水和低温等特点，在水稻 溪 、河岸和沼泽 中广泛生长 。茭草一般生长在水深 遗传育种方面具有很重要的应用价值 “。。 1．0～1．5I13_的沿岸带，耐水淹和低温 ，其群落多以茭草 中国科研人员从20世纪60