玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因和色素相关基因相互关系研究.pdfVIP

玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因和色素相关基因相互关系研究.pdf

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第一屈令固币米有害生物控制技术学术研讨会 论文摘要集 玉米弯孢霉叶斑病菌毒素相关基因与色素相关基因 相互关系研究 荆晶,刘铜,范莉莉,刘力行·,陈捷· (上海交通大学农业与生物学院,农业部都市农业(南方)重点开放实验室) 玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvulairalunata)产生的毒素和黑色素均是重要的 致病因子,因此研究毒素合成相关基因Clt.1和黑色素形成相关基因Bml的相关 系,有助于更全面揭弯孢霉叶斑病菌的致病机理。根据已知的Bml基因序列作 了10个抗潮霉素的转化子,其中转化子T2、T4、T5在菌丝颜色上表现出不同 程度的白化现象。通过转化子Southern blotting和RT-PCR验证,发现其干扰载 体pSilent.bml中Bml基因序列的发央结构已经整合到基因组中。在三个干扰予 中,Bml基因表达有不同程度的抑制,其中转化子T5中Brnl基因表达被沉默 程度达79%,菌落表现红棕色,边缘出现白化,表明DHN黑色素合成过程中受 阻。另外,通过TLC检测发现T5不能够产生所鉴定的毒素分子—(甲基.(5羟 甲基)呋喃.2.羧酸盐)。综上述表明:Bml基因不仅是弯孢霉叶斑病菌黑色素合 成途径中关键基因,而且还参与了毒素合成代谢的调控。为了进一步明确两基因 是否存在直接的互作关系,本研究正在利用酵母双杂交方法进行研究。已开展工 作如下:以玉米弯孢霉叶斑病菌野生菌株CX-3为试验材料,收集生长两天的菌 和Clt-1目的片段,加A尾后做T-A克隆,转化感受态大肠杆菌DH5a,做菌落 PCR后并将阳性菌种保存。进一步验证是否连上T载体,即提取质粒后进行酶 切,发现目的片段后进行测序,测序结果正确,于是将质粒与相应载体分别酶切 (2006BAD08A06) ·通讯作者:陈捷,教授,博上生导师,主要从事玉米绢害发生与抗性机理研究工作。E.mail: jieehen59@6sjtu.edu.gn ·共同通讯作者:刘力行,副研究员,硕士生导师,主要从事植物病理学研究工作。E-mail:lixinliu@sjtu.edu.∞ 一4一 第一届伞国玉米有害生物控制技术学术研讨会 论文摘要集 霉素平板,而pGADT7.Clt.1则涂布于氨卞霉素平板,挑选阳性克隆并做菌液PCR, 确认为阳性后提取融合质粒转入酵母菌株AHl09中。其中对pCBKT7.Bml进行 毒性检测及自激活检测后发现其不能激活报告基因,可以用于下面的实验。涂板, 行X.a-gal显示验证。 关键词:玉米弯孢霉叶斑病;致病相关基因;毒素;色素 一5一

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