面神经不同受损模型中神经元病理变化比较研究.pdfVIP

面神经不同受损模型中神经元病理变化的比较研究 1 2 1 1 1 朱鴷 何北平 刘安堂 丁维进 江华 1 第二军医大学附属长征医院整形外科，上海 200003 2 新加坡国立大学解剖系神经生物研究中心 [摘要] 目的：研究大鼠面神经不同致伤模式下面神经元变化的差异，为针对不同研究目的 选择动物模型提供依据，进而进一步为临床神经损伤修复提供理论基础；方法：建立大鼠面 神经茎乳孔处压榨、切断、抽脱模型，术后不同时间点取材，行Cresyl Violet 和胆碱乙酰转 移酶（choline acetyl transferase ，ChAT ）免疫组化染色，观察受损侧面神经核团内神经元空 间形态学上的变化，比较不同模型中受损神经元的差异，对核团区 CHAT 阳性神经元进行 计数，并以手术侧与对照侧阳性神经元总数的比值表达活性神经元比率，进行统计学分析； 结果：Cresyl Violet 染色结合ChAT 免疫组化显示压榨伤后，神经元并不表现出凋亡的形态 学特征，仅在早期合成 CHAT 能力下降，随后又逐渐恢复。切断组和抽脱组神经元功能为 永久性失活，但切断组失活的神经元在28 天内仅仅是发生凋亡前形态学变化，并未类似于 抽脱组彻底死亡。结论：上述结果提示，面神经切断伤模型消除了靶器官对受损神经元的逆 向性营养作用，且神经元在早期未发生彻底性死亡，而是进入功能上的“休眠”状态，更有利 于研究面神经损伤后的核团因素。 [关键词] 面神经损伤；面神经核团；面神经元；凋亡 面神经由于其位置表浅，出颅后行程复杂易变，各种外伤或邻近部位的手术均易造成其 不同程度的损伤。尽管目前神经修复技术日趋精益，但临床上我们常见到术后面神经功能的 恢复并不十分理想，这主要是因为损伤后不但外周神经干发生变化1，其中枢神经核团内也 发生极为复杂的反应 2,3 。为研究面神经各种受损情况下中枢神经元病理改变的差异，本实 验模拟临床常见的不同面神经损伤，建立压榨、切断、撕脱模型，系统比较不同受损模式下 面神经元病理变化的差异，为针对不同研究目的选择动物模型提供依据, 进而进一步为临床 神经损伤修复提供理论基础。 1 材料与方法 1.1 动物分组及模型建立 6-8 周成年雄性Sprague-Dawley 大鼠（新加坡国立大学医学院动物中心提供），体重 230-300g ，以麻醉合剂（Ketamine 37.5mg/ml+Xylazine 5mg/ml ；新加坡国立大学医学院动物 中心提供）按0.2ml/kg 行腹腔注射麻醉，行以下各种致损因素的处理： （1）面神经压榨伤模型：于面神经出茎乳孔处，以蚊钳第三扣钳夹面神经主干，持续 时间30秒，并于光镜下确认面神经轴索断裂，但神经外膜及周围结缔组织仍保持完整。 （2 ）面神经离断伤模型：于面神经出茎乳孔处，以显微手术剪刀横行剪断神经主干， 并将远端剪除约2mm ，避免神经对接再生。 （3 ）面神经抽脱伤模型：面神经主干暴露后，以蚊钳钳夹神经，并缓慢旋转，将面神 经自茎乳孔处抽脱，保证每只动物自茎乳孔处抽出≥5mm。 根据取材时间不同，各模型随机分为术后1天、2天、7天、14天、28天共5组，每组6只。 1.2 标本获取及切片制备 取各时间点大鼠，经左心室灌注林格氏液和 2 ％冰冻多聚甲醛，取脑干、延髓进行2 ％ 多聚甲醛4℃后固定4h ，入20 ％蔗糖溶液4℃脱水过夜至沉底。脱水后的标本取出修整，-25℃ 恒冷切片机内，从面神经丘顶端开始进行连续脑干冠状切片（25um ），每5片取一片，每块 玻片收取两张切片，并进行连续循环编号。每只动物收集5套切片（每套5张），-20℃密封保 861 存备用。 1.3 Cresyl Violet 及胆碱乙酰转移酶免疫组化染色 选取每只大鼠的第一套或第二套切片行Cresyl Violet 染色。 应用羊抗胆碱乙酰转移酶 （choline acetyl transferase，ChAT ）多克隆抗体（BD Pharmingen 公司，美国），对第三套或 第四套切片行ABC 法免疫组织化学染色（试剂盒购自Vect