银杏IspF基因的克隆与功能分析.pdfVIP

第44卷 第 10期 林 业 科 学 Vo1．44．No．10 2008年 10月 SCIENTIA SILVAE SINICAE 0ct．．2008 银杏 IspF基因的克隆与功能分析* 彭梅芳 阳义健 杨春贤 陈 敏 廖志华 (1．西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室 重庆400715； 2．西南大学药学院 重庆 400715) 摘 要 ： 采用 RACE技术 ，从银杏 中获得 MEP途径 中的第 5个酶 2一C一甲基 一D一赤藓醇 一2，4一环焦磷酸合成 酶(IspF)基因的全长 cDNA，命名为 G6却F(GenBank登录号：EF062579)。该基因cDNA全长为 897bp，包含 720bp的 开放阅读框，编码 239个氨基酸残基的蛋 白，在 GblspF的N一端有一个长为 59个氨基酸残基的质体转运肽；序列 多重比对表明GbIspF与其他植物 IspF同源。利用半定量 RT-PCR对 G6却F进行组织表达谱分析，结果表明 G6却F 在银杏根、茎、叶、果中均有表达，但表达量差异较大，在叶中表达量最高，在根中表达量最低。功能互补分析表明 G6却F能推动工程菌XL1-Blue+pTrcGblspF+pAC—BETA超量表达 p一胡萝 卜素，在颜色互补平板上呈现 口一胡萝 卜 素特有的橘黄色，证实 G6 ，具有典型的IspF基因功能。 关键词： 银杏 ；IspF；基因克隆；生物信息学分析；功能互补 中图分类号：$718．46；Q943．2 文献标识码 ：A 文章编号：1001—7488(2008)10—0049—06 CloningandFunctionalAnalysisofaNew IspF Genefrom Ginkgobiloba PengMeifang YangYijian YangChunxian ChenMin2 LiaoZhihua (1．KeyLaboratoryofEco-EnvironmentsinThreeGorgesReservoirRegionofMinistryofEducation Schoolof Sciences， SouthwestUniversity Chongqing400715； 2．CollegeofPharmaceutical~ uces，SouthwestUniversity Chongqing400715) Abstract： 2-C—methyl—D—erythritol2，4-cyclodiphosphatesynthase(IspF)isthefifthenzymeinvolvedtheMEPpathway．rI1lle genewasclonedfrom GinkgobilobabyusingRACEtechnology，andwasdesignatedasC~IspF (GenBankaccessionNo．： EF062579)．111efull·lengthcDNAofGb却F is897bpcontaininga720bpopenreadingframe(ORF)encodinga239一amino— acidpolypeptidewitha59一amino—acidplastidialtransitpeptideatitsN-termius．ThemultiplealignmentanalysisshowedGbIspF washomologouswithIspFsderivedfrom otherplantspecies．Semi-quantitativeRT-PCRwascarriedouttoinvestigatethetissue expressionprofileofG6却F indifferenttissuesincludingroots，stems，leavesandseeds．卟eresultsshowedthatGbtspF expressioncouldbedetectedinallthetissuesbutatdifferen