工程菌生产的蛋白包涵体的复性与纯化-秦.docVIP

第八章 工程菌生产的蛋白包涵体的复性与纯化 分子生物学的发展使蛋白质的表达和生产进入到一个新的时代。大肠杆菌由于遗传背景清晰，容易培养，可以大规模发酵，以及大量可供选择利用的克隆和高效表达载体而成为目前人们克隆和表达外源基因的首选菌株。但是，在实际操作中重组蛋白质在大肠杆菌中的高水平表达往往导致蛋白质聚集形成不溶性的包涵体。包涵体的形成虽有不少优点，如可溶性形式存在的外源蛋白在细胞内容易受到蛋白酶的攻击，而包涵体形式存在的外源蛋白则不易被蛋白酶降解；包涵体的形成降低了细胞内外源蛋白的浓度，有利于表达量的提高；包涵体中杂蛋白含量较低，且只需要简单的低速离心就可以与可溶性蛋白分离，有利于分离纯化；包涵体对机械搅拌和超声破碎不敏感，易于破壁，并与细胞膜碎片分离等。但是，无活性的包涵体蛋白质需经过复性使其折叠成为具有天然构象和生物活性的蛋白质，这通常是一件很困难的事情，而且不同的蛋白质其复性方法也各不相同，因此基因重组蛋白质的复性一直是生物工程下游纯化技术的研究热点之一。现有的生物技术研究和产业化过程表明，重组蛋白包涵体的变性及复性是重组蛋白类药物生产中最为关键的技术之一，是基因工程产品商业化的瓶颈，也是一个世界性难题。 第一节 包涵体形成的原因 １．什么是包涵体 　　 所谓包涵体是指由于表达部位低电势及外源蛋白质分子的特殊结构（如Cys含量高），如低电荷，无糖基化等，使得重组蛋白