鱼腥蓝细菌PCC7120alr3504基因缺失突变体的构建及表型分析.pdfVIP

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(11：1532-1536；4November2008 ISSN0001-6·209；CNll--1995／Q http：／j／ournals．im．ac．cn 鱼腥蓝细菌PCC7120alr3504基因缺失突变体的 构建及表型分析 戴燕，王莉，陈雯莉 (华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070) 摘要：c．di—GMP是新发现的真细菌所特有的第二信使，其合成和降解由双鸟苷酸环化酶和磷酸二酯 酶分别完成。经生物信息学分析，鱼腥蓝细菌PCC7120基因alr3504可能编码含有保守GGDEF结 构域的双鸟苷酸环化酶。【目的】为了鉴定该基因的功能，【方法】采用标记置换方法将 alr3504缺 失。【结果】敲除该基因后，发现缺失突变体的形态、生长速度及异形胞发育与野生型无明显差异， 但在盐胁迫条件下，突变体比野生型对钠盐更敏感。【结论】可见air3504虽不直接影响异形胞发育， 但参与了其它信号途径，研究结果为阐明蓝细菌丰富而复杂的信号转导机制奠定了基础。 关键词：鱼腥蓝细菌；cdi—GMP；GGDEF结构域；双鸟苷酸环化酶；磷酸二酯酶 中图分类号：Q933 文献标识码 ：A 文章编号：0001．6209(2008)11．1532．05 1987年，Benziman等在木醋杆菌中发现T(3，5)． c—di．GMP，EAL结构域则将c．di．GMP水解成线状的 环状双鸟苷酸 [bis一(3，5)．cyclicdimericguanosine 5pGpG，5．pGpG 再进一步被其它 PDE水解成 monophosphate，简称cyclicdi．GMP或者c—di—GMP]Ⅲ， GMP[ ] 。 两种PDE是不同的，因此将 c—di．GMP水 c．di—GMP是一种具有细菌特异性的新型第二信使， 解成线状的5-pGpG的磷酸二酯酶称为PDEA。最近 它参与绝大多数真细菌的生理过程 ，但不存在于真核 新发现的另一个蛋白结构域 HD．GYP，也具有水解 生物和古细菌中2[-5]o近几年来，对这种小分子的研 c—di．GMP 的功能 l【们，与 EAL结构域不同的是， 究使人们不仅发现了调节胞内c—di．GMP浓度的复杂 HD—GYP将 c—di．GMP直接水解成GMPf3】。含这些保 体系，而且还发现 c．di—GMP调控着各种生理过程， 守结构域 的蛋 白在真细菌中广泛存在 ，例如在 包括细菌的运动性(motility)，生物膜的形成(biofilm Eschericiacoli中，有 l9个 GGDEF蛋白质和 17个 formation)和毒力 (virulence)等等 【。 EAL蛋白质，而在 Vibriovulnificus中这种蛋白的数 c—di—GMP 的合成和降解分别由双鸟苷酸环化酶 量高达 100个 2【J。在蓝细菌中，存在 l6个此类蛋白， (DGC，diguanylatecyclase)和磷酸二酯酶 (PDE， 这暗示着 cdi．GMP可能参与蓝细菌信号转导过程。 phosphodiesterase)完成。其中DGC催化活性功能为 本研究首次在AnabaenaPCC7120中研究 c．di—GMP， 保守结构域 (conserveddomain)GG(D／E)EF ，PDE 由于 air3504编码只含有 GGDEF结构域的蛋白，不 催化活性功能为EAL保守结构域 。这种结构域的 含有其他接受信号的结构域，蛋 白结构简单，因此将 命名源于它们的保守序列：Gly．Gly．Asp．Glu-Phe和 alr3504敲除，为探讨蓝细菌丰富而复杂的信号转导 Glu—Ala—Leu]。GGDEF结构域催化两个 GTP合成 系统奠定基础。 基金项 目：国家自然科学基金