油菜油体钙蛋白基因BnClo1的克隆和表达.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2008，34(11)：1921-1928 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DOI：10．3724／SP．J．1006．2008．01921 油菜油体钙蛋白基因BnClol的克隆和表达 丁 勇 ，2 陈庆波 徐春雷 常 玮 甘 莉 1． (华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，湖北武汉 430070；西南林学院资源学院，云南昆明650224；中国科学院昆明植物研 究所，云南昆明650204) 摘 要：应用同源序列克隆法设计同源简并引物，结合 RT-PCR和 RACE—PCR技术，从甘蓝型油菜中分离克隆了编 码 28．1kD油体钙蛋白(caleosin)的基因BnClol。其全长 1058bp的BnClolmRNA(GenBank中序列号为 AY966447) 包含完整的开放阅读框和3末端 Poly(A)尾巴结构，染色体 DNA结构上含 6个外显子和5个内含子。Northern杂交 结果表明，油菜中 BnClol在种子形成 中期开始丰富表达，在种子形成后期，即种子开始脱水成熟时期，高量稳定地 表达 。半定量PCR结果显示，BnClol在油菜种子吸水膨胀后前2d的茎中明显表达。证 明在油菜种子发育期 间，BnClol 对 mRNA 的转录表达是由胚胎发育来调控 的，具有显著的时空特性，并与油体的形成和积累密切有关 。推测的 caleosin蛋 白为 245个氨基酸残基 (GenBank中序列号为AAY40837)组成的两性蛋白质，主要含 3个结构域即由N末 端 l～16位氨基酸残基组成的 Ⅱ一螺旋和 17～61位氨基酸残基组成 的强亲水性的随机卷曲构成的N一末端亲水性结构域； 由80～120位氨基酸残基组成的中间疏水性结构域和 C一末端亲水性结构域。N一末端亲水性结构域包含一个潜在的结 合 Ca2的EF一手结构。中间疏水性结构域包含一个潜在的脯氨酸一结 (proline—knot)模体，在 92～114位氨基酸残基组 成的 a一螺旋跨膜区域，推测在 caleosin蛋 白与单层磷脂层和油体锚定结合上及增加种子油体的稳定性上起着重要的 作用。 关键词：油体钙蛋白；RACE；基因克隆；同源简并引物；序列分析；Northern杂交 CloningandExpressionofBnClolGenefrom Brassicanapus DINGYong1,2CHENQing—Bo ，XUChun—Lei，CHANGWei。，andGANLi， (NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImproement，HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070，Hubei； SchoolofNaturalResources， SouthwestForestryCollege，Kunming650224，Yunnan； KunmingInstituteofBotany,ChineseAcademyofSciences，Kunming650204，Yunnan， China) Abstract：Triacylglycerols(TAGs)isstoredinseedsasanutrientforgerminationandpostgerminativegrowthofseedlings． TAGsstorageisconfinedtodiscretesphericalorgnaellescalledoilbodies．Plantseedoi1bodiescompriseamatrixofTAGssur— roundedbyamonolayerofphospholipidsembeddedwithabundantoleosinsandsomeminorproteins．Threeminorproteins， temporarilytermedcaleosin(Sop1)，steroleosin(Sop2)andSop3，havebeenidentifiedinoilbodiesofdiversespecies．Wihthte rapiddevelopmentofmolecularbiology,h