介入途径下中药白芨提取物作为基因递送载体的可行性的研究.pdfVIP

学者开始将其应用于各种肾脏疾病的诊断与鉴别诊断，但几乎所有的实验都是在I．5TMR机器上进行 的。由于3．0TMR自身的优势，逐渐被更多的医疗机构认可，并将更多的被应用到临床实践工作中。 作为实验工具初步探讨正常人肾脏血氧水平．首先，回顾一下高场强MR的优势：高信噪比(Signal Noise Ratio，SNR)和高空间分辨率。但是，也必须注意到，SNR的提高受体内组织本身纵向弛豫时 间Tl和表面横向弛豫时间T2幸的限制。再者。磁场的不均匀程度也会增加，使T2·效应降低，从而削 弱了BOLD信号。由于Tl的延长，磁敏感效应，血流和化学位移所产生的伪影也变得更加明显。尽 管存在一定限制的因素，但是随着MR软、硬件技术的深入研发，这些问题已得到有效的解决。本研 究采用3．oT高场强MR对肾脏进行研究，是由于其良好的信噪比和较好的空间分辨率，并可以在一 次较短的屏气时间内(19s)完成数据采集。尽管高场强磁场会增加磁敏感效应，但本实验成像结果 显示，BOLD图像的肾脏分辨率没有受到明显的影响，这和以往相关的报道结果一致。这可能和我们 相应的减小了TE回波时间(最长TE时间为33．5 ms)，以使磁敏感效应所产生的伪影减少有关。 3．0T MRI测量人类活体肾脏为无创性观测肾脏皮、髓质血氧水平提供了可靠的检查手段。同时 BOLD成像可以通过测量R2·值半定量地早期动态探察到髓质缺氧的情况，这无论是对由于年龄等生 理因素，还是其他病理因素所引起的肾脏氧合功能的改变都有着非常重要的意义。 介入途径下中药白芨提取物作为基因 递送载体的可行性研究 武汉，华中科技大学附属协和医院介入放射科 (430022) 夏向文冯敢生郑传胜梁惠民 华中科技大学附属协和医院放射科李欣 白芨作为药用已有数千年的历史，其有效成分是一种葡配甘露聚糖。本课题组对我国传统中药白 芨进行了系列的研究，已完成的工作证实白芨提取物具有抗肿瘤作用及强大的血管栓塞作用，并能抑 制肿瘤新生血管生成及侧枝循环的建立。同时，白芨提取物也可作为优良的基质资料和载体，利用白 芨提取物制备的白芨载药微球，具有良好的缓释作用，其悬浮性、分散性及生物相容性好。 本研究是前期研究的深入和发展，拟进一步发挥白芨多糖的药物载体的作用，开发一种新的适合 于介入途径给药的基于白芨多糖的基因递送载体。本文报道了可用于负载基因的阳离子型白芨多糖的 制备方法及其作为基因载体的可行性，实际上，同时具有抗肿瘤作用的阳离子型基因载体尚未见诸文 献报道。 资料与方法 白芨茎块购于武汉市医药公司，高碘酸钾、硼酸、硼砂、盐酸羟胺、溴酚蓝(天津科密欧公司， 医院何文涛博士惠赠，本实验室扩增。DMEM高糖培养基及胎牛血清购I刍Hyclone公司，脂质体为 137 RE．5220型减压旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，85．1型恒温磁力搅拌器(上海国华仪器厂)， VERTEX 荧光显微镜为Olympus公司产品，冰冻切片机为Leic0公司产品。 1．白芨多糖的提取、纯化：白芨块茎干制品粉碎、过筛、烘干，加20倍体积蒸馏水，60℃回流 提取4h，重复提取1次，合并2次提取液。离，t),(5000／r，10rain)，取上清用抽滤，70℃减压浓缩至 较小体积，加3倍体积无水乙醇沉淀。沉淀溶于最小体积水中，Sevag法脱蛋白至考马斯亮蓝0-250 d，蒸馏水透析2 法检测至无蛋白质被测出。所得溶液用流水透析3 d，真空冷冻干燥。’ 将冻干的细纤维状物溶于双蒸水，配成1％溶液，先后在阴离子交换纤维素DE．52柱和Sephadex G-100柱上层析，收集多糖洗脱峰，对双蒸水透析2d，冷冻干燥得纯化白芨多糖。 2．阳离子型白芨多糖的制备：采用胺化还原方法制备阳离子型白芨多糖。取19纯化的白芨多糖， 配成l％多糖水溶液，向其中加入适量高碘酸钾，在室温、避光条件下剧烈搅拌反应48h，反应结束 后以双蒸水在4C下透析2 糖中醛基浓度调整为6．25mmol／L；另取适量精胺(使精胺与醛基摩尔数之比为1．2