抗肿瘤抗生素黑莫它丁生物合成基因簇的克隆和其功能研究.pdfVIP

抗肿瘤抗生素黑莫它丁生物合成基因簇的克隆和其功能研究.pdf

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第八届全国微生物学青年学者学术研讨会 胖以及炎症性肠道疾病患者作为样本,以Illumina/Solexa测序仪产生的短片段 进行胃肠道微生物群宏基因组的分析。通过对124个样品的分析,总产生数据 量576.7Gb,是以往相关研究的200倍。在此基础上进行分析,并形成了一个 非冗余的参考基因集,其中包含了所有常见的肠道菌群基因,90%以上为拟杆 菌和厚壁菌,而通过健康人群和肥胖症患者、炎症性肠道疾病患者的比较和关 联分析,显示肠道疾病患者的肠道细菌种类和基因数目均比健康人群少。而将 同一样品的短片段分析结果和454、Sanger分析结果进行比较,结果证实无偏 差性,从而证明了利用Illumina/Solexa短片段进行宏基因组的研究的可靠性。 亚洲人和欧洲人的饮食和生活习惯差异性,这可能导致肠道微生物的种类 开展了大规模的对中国人的取样分析,目前己获取了73个糖尿病人的样本并进 行分析。 目前的宏基因组学的研究方法主要基于16SrRNA的物种分类和基于 Metagenome的基因预测以及注释等。而对于后续的功能分析,我们还将采用 类、基因和人体健康的关系和影响的机制。 抗肿瘤抗生素黑莫它丁生物合成基因簇的克隆及其功能 研究 马俊英。,汪中文,左甸光,罗明和,张长生,鞠建华。 (中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室,广东省海洋药物重点实验 室,中国科学院南海海洋研究所,广州510301) 黑莫它丁是由吸水链霉菌ATCC53653产生的一个结构新颖、具有良好抗 癌和抗菌活性的环脂肽类抗生素。尽管已有关于其分离、纯化及化学全合成的 报道,但是目前国际上尚无关于其体内生物合成的相关研究及报道,而深入研 究其基因簇结构和阐明体其内合成机制,对于利用组合生物合成技术进行改造 43 第八届全国微生物学青年学者学术研讨会 以得到新的同系化合物及环脂肽类抗生素的开发应用具有重要的指导和借鉴意 义。本研究通过基因组扫描测序和生物信息学分析获得其生物合成基因簇,采 用文库构建及特异的引物筛选方法获得含有黑莫它丁生物合成基因簇,并利用 PCR—targeting技术对其生物合成基因簇的各结构基因、后修饰基因及边界基因 进行突变。对突变后的菌株进行接合转移实验、接合子的耐药表型分析及PCR 验证,得到双交换突变株。进一步对双交换突变株进行发酵和HPLC分析得到 其突变后的代谢产物谱,并对突变前后不同的化合物进行NMR、MS分析,以 进行结构解析,最终阐明其生物合成过程和合成机制。研究结果表明,黑莫它 它丁的生物合成有关,包括3个调控基因,分别命名为A、C、hmtD;1个乙 酰谷氨酸激酶蛋白基因,命名为B:5个NRPS相关蛋白基因,分别命名为 为y;1个ATP酶基因命名为R一1。通过对黑莫它丁基因簇中的2个NRPS结 基因簇的正确性并确定了基因簇的边界;而进一步对4个后修饰基因hmtN、 hmtO、hmtT和hmtU进行敲除则得到了6新的生物合成中间体。此项工作阐 明了黑莫它丁的生物合成途径和机制,发现了两种新氧化酶催化形成C—N键和 芳环C.C键的形成机制,为创新药物的研发提供了物质基础。 E-mail: 通讯作者:Tel:+86-20 jju@scsio.ac.cn;

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