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了希望，有较好的临床应用前景，从本研究结果看，大剂量肝瘾口服液与日达仙联合应用预防效果最佳，
如何确定肝瘾口服液的最佳预防剂量，而无明显毒副作用，是否能够通过改进与其它药物
联合应用的方式、方法从而进一步提高它的防治效果．这均有待于进一步深入、全面的研究．
苦参碱和氧化苦参碱对SMMC-7721细胞增殖及
JAK—STAT信号通路的影响
I)
河北医科大学第四临床医院消化内科(05001赵军艳姚树坤殷飞
苦参是传统中药，有抗寄生虫、抗肿瘤、抗肝损伤等药理作用．并有一定的调节免疫作用．苦参碱
和氧化苦参碱是其主要有效成分，研究发现苦参碱和氧化苦参碱在体外可抑制肿瘤细胞增殖诱导凋亡．并
可通过多种途径产生抗肿瘤作用。JAK．STAT通路异常与肝癌的发生发展有密切联系，苦参碱和氧化苦参
碱抑制肿瘤细胞增殖机制如何，其作用途径是否与细胞信号转导通路有关，目前尚不清楚。为研究苦参碱
和氧化苦参碱抑制SMMC·7721增殖的机制，本研究以不同浓度苦参碱和氧化苦参碱作用于人肝癌细胞株
其对信号转导通路中重要蛋白激酶STAT3、STAT5在肝癌细胞表达和活化的影响，为寻求治疗肝癌的临床
‘
有效药物提供理论基础。
1．材料与方法
1．1 细胞：人肝癌SMMC．7721细胞株，中科院上海细胞生物所．
1．2药品和试剂苦参碱和氧化苦参碱为山东振东金品制药有限公司惠赠．Star3引物，Star5引物，
P-STAT3单克隆抗体，羊抗人STAT5多克隆抗体均为美国SantaCruz公司产品：PVDF膜购于博海生物
自北京中山生物工程公司。
1．3方法
1．3．1细胞培养
II
用含5％FCS(胎牛血清)、青霉素100u／ml、链霉素100
I．3．2MTT法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．7721细胞株增殖影响
I
接种于96孔培养扳，分别加入不同浓度苦参碱溶液，使其终浓度为0．5、1．0、1．5，2．5、5．0、10．0
mg／ml；
至200u p Il
I．另设空白孔(只加培养液200I)和对照孔(只加细胞悬液2001)，每种浓度均作3个平行孔，
(对照孔A值一刚药孔A值)，对照孔A值×100％，计算抑制率。
1．3．3 RT-PCR法检测苦参碱对肝癌SMMC．772l细胞Star3、StatsmRNA的影响
I
取4IIl(1u u
g)提取的肝癌细胞总RNA加入预先配置的逆转录体系中，加入M．MLIv逆转录酶l
游：5t-TGGCTTGACGG
退火温度56．6℃．
TGCTGTCACCTTCACCGTl℃．3．，扩增的目的片段长度为1
89bp，退火温度50．4℃．RT-PCR扩增产物，
TMl200型读胶仪读取扩增条带的光密度值进行分析，以目标基因与
凝胶用美国ST公司Alphalmager
。
争aetin扩增产物的光密度值的比值计算表达水平。
1．3．4Western
分别提取对照细胞和加药作用后细胞总蛋白，考马
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