SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进.pdfVIP

第 24 卷第 4 期 湖 　北 　工 　业 　大 　学 　学 　报 2009 年 08 月 Vol . 24 No. 4 　Journal of Hubei University of Technology Aug. 2009 [文章编号] 1003 - 4684 (2009) 0400 1603 SD S聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进 叶长春 (湖北工业大学生物工程学院 , 湖北 武汉 430068) [摘 　要] 针对常规的 SD SPA GE 染色脱色耗时长 ,还需使用甲醇的缺点 ,对传统的 SD SPA GE 染色脱色进 行了改进 ,用无毒的乙醇替代有毒的甲醇. 改进后的 SD SPA GE 染色脱色具有耗时短 ,且不需要使用甲醇的 优点. ( ) [ 关键词] SD S聚丙烯酰胺凝胶电泳 SD SPA GE ;染色 ;脱色 ;考马斯亮蓝 [ 中图分类号] Q51 [文献标识码] : A 　　SD S聚丙烯酰胺凝胶 电泳是一种检测蛋 白质 恒温水浴锅 ,上海一恒科技公司 H W S26 产品. 纯度 、评估蛋白质分子量的生化分析方法. 电泳后的 凝胶可以通过多种染色法对蛋白质进行检测 ,最常 2 　方法与步骤 ( ) 用的是考马斯亮蓝 Coo ma ssie brilliant blue , CBB 染色法[ 1 ] . 此法具有特异性强 、操作简单及干扰因素 2 . 1 　样品的准备 少等优点. 因为凝胶中存在 SD S , SD S 的存在干扰 将诱导前后的大肠杆菌培养液各取 1 mL ,加在 了考马斯亮蓝与蛋白质的结合. 而甲醇可以破坏凝 EP P ENDO RF 管中 , 以 12 000 r/ min 离心 15 min , μ 胶中的 SD S ,使考马斯亮蓝染色得以顺利进行 ,所以 弃上清 ;再加 500 L 超纯水 ,混匀 ,12 000 r/ min 离 μ 通常对电泳后的凝胶采用含 甲醇的染色液和脱色 心 15 min ,弃上清 ;再加 30 L 超纯水 ,混匀. 液. 甲醇是一种无色 、透明、易燃 、易挥发的有毒液 2 . 2 　SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDSPA GE) ( ) 2 . 2 . 1 　溶液的配制 　贮液 100 mL :30 g 丙烯酰胺 ; 体 ,经人体代谢产生甲醛和甲酸 俗称蚁酸 . 甲酸会 累积在眼睛部位 ,破坏视觉神经细胞 ,产生永久性损 0 . 8 g N ,N ′- 甲叉双丙烯酰胺. 加超纯水定容至 害. 甲酸进入血液后 ,会使组织酸性越来越强 ,损害 100 mL ,4 ℃保存. [2 ]