RKIP的克隆、表达及其影响肿瘤细胞迁移性质的初步研究.pdfVIP

大 医 版 东 南 学学报 学 JSoutheastUniv MedScEddi、 2一。…14，’～。ec；’33(＼6)／：。7…52。7。5。5 · 752 · SoutheastUniv (MedSciE RKIP的克隆、表达及其影响肿瘤细胞 迁移性质的初步研究 皮亚洲，华子春 (南京大学 医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 210093) [摘要]目的：研究Raf激酶抑制蛋 白(RKIP)在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响。方法：通过 PCR扩增得到 RKIP基因片段，使用BamHI和Hind11双酶切并回收，然后插入双酶切过的原核表达栽体pET28a(+)，得 到pET28a—RKIP重组质粒。将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3)，经 IPTG诱导表达，表达产物经Ni金属 螯合层析纯化得到His—RKIP重组蛋白。通过伤 口愈合实验 ，观察不同浓度 的重组 RKIP在细胞外对肿瘤细 胞迁移的影响。结果：重组RKIP获得了高效表达和分离纯化，伤 口愈合实验表明，在低浓度重组RKIP作用 下A549肿瘤细胞迁移速度增加，在高浓度下肿瘤细胞迁移速度降低。结论：重组 RKIP在细胞外具有促进 和抑制A549肿瘤细胞迁移的双重作用，具体表现为低浓度时促进A549肿瘤细胞迁移，高浓度时抑制A549 肿瘤细胞迁移。 [关键词]Raf激酶抑制蛋白；表达；纯化；细胞迁移 [中图分类号]Q786 [文献标识码]A [文章编号]1671。6264(2014)06—0752。04 doi：10．3969／i．issn．167卜6264．2014．06．016 Cloning，expressionandpurificationofRKIPandpreliminary studyonitsbiologicalpropertiesin tumormetastasis PIYa。zhou，HUA Zi。chun (TheStateKeyLaboratoryofPharmaceuticalBiotechnology，Na ngUniversity， ng210093，China) [Abstract]objective：ToinvestigatetheRafkinaseinhibitorprotein(RKIP)’Sextracellulareffectontumor metastasis．Methods：TheRKIPencodinggenefragmentwasamplifiedbyPCR，digestedwithBamH IandHind 111，andinsertedintothesamedigestedexpressionvectorpET28a(+)，thusbecomingrecombinantplasmid pET28a。RKIP．TheexpressionplasmidpET28a—RKIPwastransformedintoE．coliBL21(DE3)，theninducedby IPTG．TherecombinantproteinHis—RKIPwaspurifiedthroughNi affinitychromatography．Throughwoundhealing experiment，wecouldunderstandtheextracellulareffectoftheconcentrationofRKIPproteinontumormetastasis． Results：RecombinantRKIPwasexpressedandpurified．Thewoundhealingexperimentdemonstratedthattherate oftumorcellmigration atfirstgrew astheconcentration grew andthendroppedastheconcentrationcontinuedto grow．Conclusion：Th e RKIP protein could eitherpromote orinhibitA549 cellmirgation depending on the