￡聚赖氨酸产生菌的筛选一.pdfVIP

FOODANDFERMENTAT10NINDUSTRIES ￡一聚赖氨酸产生菌的筛选 段 杉，朱伟珊 (华南农业大学食 品学 院，广东广州 ，510642) 摘 要 改进 了筛选 ￡一聚赖氨酸产生菌的方法。在加有复合抑菌荆的初筛平板上涂布土壤悬液 ，于 28℃培养 7 d后喷洒次甲基兰溶液显色，挑 出周 围形成透 明圈的菌落 ，再次接种培养 ，7d后挖取菌落周 围的琼脂块，利用文 中设计的简易转移装置，将琼脂块 中的水溶性成分转移到滤纸上 ，然后分别用茚三酮试剂和 Dragendorff试剂检 测 ，挑取对 2种试剂都呈阳性的菌落，进一步摇瓶复筛，发现 l株放线菌的发酵液 中有e一聚赖氨酸。经生化反应 鉴定和分子生物学鉴定，确定该菌株为灰橙链霉菌 (Streptomycesg sPoⅡ“rⅡn￡c“s)。 关键词 ￡一聚赖氨酸 ，放线菌分离，灰橙链霉菌 ￡一聚赖氨酸的用途很广泛 ，可 以作为食 品防腐 葡萄糖 50g，(NH )SO 10g，酵母膏 5g，Mg— 剂，作为药物载体 、细胞融合中的促融剂、人工合成抗 SO4 ·7H2O 0．5g，ZnSO4 ·7H20 0．04g，FeSO4 · 原的载体、化妆品中的增 白剂等 。 7H2O 0．03 g，Na2HPO41，5 g，KH2PO41．5 g， 2002年 ，MasanobuNishikawa等对 F聚赖氨酸产生 pH6．8。其中葡萄糖要与酵母膏分开灭菌 。 菌进行了大规模筛选，其研究表明，F聚赖氨酸基本上是 1．3 方 法 由链霉菌科 的一些菌株产生的，少数麦角真菌也能产 1．3．1 初 筛方 法 生 ]。但作者并未详细披露其所采用的筛选方法。2005 将经过适当稀释的土壤悬液涂布于初筛平板上， 年，我国学者朱宏阳等 也对 F聚赖氨酸产生菌进行 了 于28℃倒置培养 7d，然后 向每个平板上喷洒 0，039／6 筛选，他们在初筛培养基中加入了次甲基蓝 ，并利用检 次 甲基兰溶液 ，放置 2h后观察，挑取周围出现透明 测生物碱的dragendorff试剂检测，从而使筛选的特异性 圈的菌落，重新接种到新鲜干净的平板上，再于28℃ 大为提高。 培养 7d，挖取菌落周围的琼脂小块，置于2片圆形滤 在上述研究的基础上，笔者改进了初筛显色和检 纸上，然后采用图1所示 的简易转移装置，将琼脂 中 测方法 ，并设计了一种简单的转移装置，可以方便地 的成分转移到滤纸上，分别向这 2片滤纸上喷洒 dra— 将琼脂块中成分转移浓缩到滤纸上 ，简化 了检测过 gendorff试剂和茚三酮试剂，保 留对这 2种试剂都显 阳性的菌落 ，进一步复筛 。 程，最终筛选到了 1株 e聚赖氨酸产生菌。 1 材料与方法 1．1 土 样 采 自广东省各地 。 1．2 培养基 1．2．1 初筛培养基 甘油 10g，(NH )2so,0．66g，MgSO,·7H2O0．25 g，氯化钠 0．5g，ZnS04 ·7H200．01g，FeS()4 ·7H2O 图 1 琼脂 中水溶性成分简易转移装置 0．01g，KHP ·3HO1．0g，酵母膏0．1g，抑菌剂 (重 1．3．2 复 筛方法 铬酸钾 3Onag，氟哌酸 5mg，青霉素 2mg，制霉素 5O 参考文献E4]和[5]的方法，于 28℃振荡培养， rag)，琼脂粉 15g，pH7．047．2，水 1000mL。 220r／rain，直至培养基 的pH 降低到 4．0为止。离 1．2．2 复筛培养基 心去除菌体 ，采用文献[