膜翅目细腰亚目昆虫分子系统发育的研究进展.pdfVIP

24 走J句21世纪的中国昆虫学 膜翅目细腰亚目昆虫分子系统发育研究进展 朴美花 陈学新 何俊华 (浙江大学农学院应用昆虫研究所，杭州 310029) 擅要本文回顾了细晨亚目昆虫的分子系统发育的研究情况，舟绍了对不同 试验材料的DNA的提取法、不同研究对象(不同DNA片段，基因)、PCR所用引物及 扩增条件及其巳进行过的分子系统发育分析的类群，并且总结了舟子系统发育研究 已取得的研究成果。 美麓词分子系统学系统发育细腰亚目 膜翅目(Hymenoptem)是一个大目，已知种类达100 仅次于鞘翅目及鳞翅目。根据生物学特征区分为3个谱系(Gaston，1991)，即自由生活型 (free—livingli∞E鲈)、社会型(social llneage)。其中，寄生性膜翅 llne鸭．)和寄生型(parasitic 目(细腰亚目昆虫)大多数是害虫的重要天敌，在害虫的刍然控镧方面具有重要作用。寄生 蚌个体较小，因此形态特征为基准的系统发育常常遇到困难，现在分子生物学及其技术以迅 猛的速度发展，以分子数据来描述细腰亚目内各个类群之间的关系，尤其是寄生类群的形成 和进化引起许多国家学者的重视和兴趣。本文对近年来关于细腰亚目昆虫的DNA提取法、分 子系统学研究的对象(不同DNA片段／基因)，PCR所用引物及扩增条件、研究过的类群以及 系统发育研究作一简要的总结。 1膜翅目细腰亚目昆虫DNA提取法 1．1 et81．，1997] 100％ETOH处理的新鲜标本【Gimeno TE缓冲液中悬浮一冷 样品一碾碎一在37℃下用ProK培养lsh一醋酸钠／ETOH沉淀一15nIl 藏备用。 1．2 et I帅％ETOH中的浸标本[Dowtoaa1．，1998，『1999) 8)加 10ram ED· 100ram 8)，10ram Tri—HCl(pH NaCl和lmM岬中冲洗3次(15rain／次)斗400_【11 TA，1％SDS加lO腭蛋白酶K软化组织一室温下过夜一酚／ETOH沉淀一100一无菌水中溶解一 置于一20t。 2 PeR引物及扩增条件 2．1引鞠 PCR扩增不同DNA片段／基因所用引物的序列列于表1。 昆虫区系分类 25 裹1扩增不周DNA片段／基园所用弓I袖序列 2．2 PCR扩增条件 (1)16S el (2)165和28SrDNA(Dowtona1．，1998) 5循环(94℃变性1rain一45—55℃退火1 一55。c退火1ⅡIiIl一72℃延伸lman)一72℃延伸Imin。 eL (3)细胞色素b基因中获得386bp编码片段(Gimenoa1．1997) 50循环(92t变性lmin一45t退火lⅡlin一72℃延伸2rain)。 D2 et (4)28S a1．，1997) rRNA基因中获得4“一464bp编码片段(Gimeno