植物多酚氧化酶活性测定方法的改进.pdfVIP

维普资讯 第 25卷第 1期 云南师范大学学报 Vo1．25NO．1 2005年 1月 JournalofYunnanNorma1University Jan．2005 植物多酚氧化酶活性测定方法的改进 李忠光， 龚 明 (云南师范大学生命科学学院，云南 昆明650092) 摘 要： 文章介绍了多酚氧化酶反应产物邻醌的吸收光谱和酶测定反应的动力学分析，确定了邻醌的 最高吸收光谱和酶测定的适宜参数。这一测定方法与原方法Ⅲ相比，提高了多酚氧化酶测定的准确性、 重复性和可比性，使灵敏度提高了5倍 。 关 键 词： 改进 ；多酚氧化酶；动力学 曲线 中图分类号： 0946．5 文献标识码 ：A 文章编号： 1007--9793(2005)01一OO44一O2 多份氧化酶 (Polyphenoloxidase，PPO)是植 子，以0．1 HgC12消毒 10min后，漂洗干净，于 物体内普遍存在的一种非线粒体 内的末端氧化 26．5℃下吸涨 12h，播于垫有 6层湿润滤纸的带 酶E ，它包括单酚氧化酶 [酪氨酸酶 (tyrosi— 盖白磁盘 (24cm~16cm)中，于26．5℃下黑暗中 nase)，EC．1．1O．3．2]、双氧化酶[儿茶酚氧化酶 萌发 60h。随后，于同样的温度下继续培养 1O (catecholoxidase)，EC．1．1O．3．2]、漆酶 (1acca— 天，每天光照 16h和不断补充蒸馏水。苗龄为 se，EC．1．1O．3．1)[]。它可 以把酚类物质如单 12．5天的玉米幼苗根系作为PPO测定材料。 酚、邻苯二酚、邻苯三酚、对苯二酚等氧化为相应 另一种材料为马铃薯块茎，品种为H一6，购 的醌类物质E6,7]。醌类物质对病原微生物起着抑 自昆明市种子公司。 制作用或杀伤作用，具有一定的抗病能力。因此， 1．2酶液的提取 在感病的植物体中，PPO活性都有不 同程度的提 酶液的提取按朱广廉[1]方法。 高，以抵抗病原体进一步侵染健康 的植物 组 l-3PPO反应产物吸收光谱分析 织E]。此外，PPO对食品和饮料生产也会产生 马铃薯块茎 PPO与底物反应后 ，加入 2O 重大影响，它不仅影响食品和饮料的色泽 ，也影响 三氯乙酸终止反应 。反应产物用 UNIC一2000 其品质，特别是在制作绿茶、红茶、烤烟和水果类 分光光度计于波长400～550am下每隔2nm测 饮料 的过程 中更为突 出[8]。所 以，准确测定 定光密度。 PPO活性，具有重要的生理和现实意义 。 1．4PPO测定反应的动力学分析 PPO常用的测定方法有 比色法E1]和氧电极 马铃薯块茎PPO与底物反应后，在不同时间 法[6]，本文通过对 比色法 的改进 ，极大地提高了 段检测两个波长 410am和 525am下的光密度。 PP0测定的准确性、重现性和可比性，使灵敏度提 取0～3min时间段，即3min反应时间来计算酶 高了5倍。 活性，并且用光密度变化0．01个单位所需要的酶 液量作为一个活力单位 (U)。 1- 材料的准备和处理方法 2． 结果与分析 1．1植物材料的培养和选购 挑选饱满 的玉米 (ZeaMays)品种大黄的种 PPO与邻苯二酚反应 的反应产物邻醌用 · 收稿 日期：2004--04--06 基金项 目：国家 自然科学基金(39860