魔芋开放式组织培养技术研究初探.pdfVIP

魔芋种植 魔芋开放式组织培养技术研究初探 赵青华陈永波杨朝柱谢玲玲降巧龙 (湖北省恩施州农业科学院魔芋研究所湖北恩施445000) 摘要：通过在培养基中添加抑菌剂，以达到培养基不灭菌的目的。试验针对六种抑菌剂设计了不同条件 的四组试验，结果表明抑菌剂H198在浓度为400倍、培养基pH值5．5时抑菌效果及分化状况最优，接种 需在相对洁净的接种室进行，培养容器以传统组培容器最适合． 关键词：魔芋：开放式；组织培养 魔芋为天南星科魔芋属多年生草本植物，其产品远销海内外，因此市场需求量大，而传统的繁 殖方式已经不能满足供种需要，组培快繁是加快优良品种推广的重要手段。魔芋组织培养技术已经 日臻成熟，试管苗、试管芋的生产已基本进入工厂化生产阶段‘m】，但是，传统的组培方式成本较高， 相应的试管苗(芋)成本增加，我们力求通过开放式组织培养的方式降低生产成本提高生产效率。 有关葡萄开放式组织培养的研究已取得了成功，抑菌剂的添加可以简化组织培养的程序。降低对环 境的严格要求‘3-5]。 1材料与方法 1．1试验材料 种抑菌剂。 1．2．2 2007年生产的清江花魔芋丛生芽以及2008年生产的愈伤组织。 1．2试验方法 种抑菌分别添加一定量到魔芋培养基中，培养基不通过高温灭菌，在相对洁净的环境下接种带少量 愈伤组织的丛生芽，观察抑菌效果和魔芋组织的生长状况。 采用不同的操作方法，观察操作方法对抑菌效果的影响，其操作方法为： I培养瓶在工作台上用紫外灯照射30min，刀片、镊子用灭菌器灭菌； II培养瓶在工作台上用紫外灯照射30min，刀片、镊子用500倍抑菌剂浸泡； Ⅲ培养瓶不进行紫外灭菌，刀片、镊子用500倍抑菌剂浸泡； Ⅳ培养瓶不进行紫外灭菌，刀片、镊子用灭菌器灭菌： V培养瓶、刀片、镊子均不灭菌，工作台接种： Ⅵ刀片、镊子用500倍抑菌剂浸泡，愈伤组织在500倍灭菌剂中浸1．2s： Ⅶ培养瓶、刀片、镊子均不灭菌，制剂间接种： Ⅷ对照：培养基高压灭菌后，培养瓶在工作台上用紫外灯照30min，刀片、镊子在70％的酒 精溶液中灭菌，在工作台上按传统方法接种。 96 魔芋种植 1．2．3将添加抑菌剂的培养基盛入五种不同的培养器皿，接种愈伤组织，观察生长分化情况。 分别调节pH值为5．0、5．5、5．8、6．0和6．2，接种魔芋丛生芽。 2结果与分析 2．1不同抑菌剂种类和浓度对魔芋组织分化的影响 试验于2008年5月16日进行，7月1日观察结果如下： 的培养基中，随着抑菌浓度的减小，污染率升高，但随着抑菌剂浓度升高，组织坏死率升高；H214、 14215抑菌剂加入培养基后起泡，组织褐交、腐烂，不适合用于魔芋的组织培养，H198为较理想的 抑菌剂，组织全部污染，抑菌效果不理想。 2．2不同接种条件对魔芋组织分化的影响 该试验于2008年7月2日进行，每个处理50瓶，接种后每隔8d观察记载一次污染情况和生长 状况，其结果如下： 魔芋种植 较试验(1)和(4)可知，培养瓶是否进行紫外灭菌与组织分化没有多大影响，接种前培养瓶可不进行紫 外灭菌；(3)比较试验I、Ⅱ、Ⅵ可知，抑菌剂对愈伤组织的分化有抑制作用，在接种器皿表面的少 量抑菌剂仅在初期抑制组织生长和分化，主要是引起褐变，后期相反生长良好；将愈伤组织在抑菌 剂中浸泡，过多的抑菌剂不仅使组织严重褐变，而且影响到后期的分化；(4)比较V和Ⅷ可知：培养 瓶、刀片、镊子均不灭菌相反比传统接种操作方式组织分化率要高，生长状况要好，可能是器皿不 灭菌对组织损伤较小；(5)由试验Ⅶ可看出，接种不能在杂菌太多的环境中进行，接种室必须保持相 对洁净，因抑菌剂是针对特定环境开发的，具有相对的专一性。 综合分析上述试验，在开放式组织培养过程中，可以在相对洁净的普通实验室接种，而不必在 超净工作台上进行严格的无菌操作。 2．3不同培养容器对魔芋组织分化的影响 试验I、II采用了较大容积的塑料盒，其特点是操作方便，每盒接种的外植体数量多。但缺点 魔芋