探索脑化学—纳米电化学监测单囊泡、突触间隙释放化学信号分子及形貌分析.pdfVIP

探索脑化学一纳米电化学监测单囊泡、突触间隙 释放化学信号分子及形貌分析 程介克 (武汉大学化学与分子科学学院分析科学中心，武汉430072) 时空分辨监测单细胞释放化学信号分子(神经传递物质)是探索脑化学的基础。哺乳类 动物细胞很小(直径＆_15gm)、囊泡更小(直径100．400nm)、突触问隙极小(10．50nm)， 神经递质释放速度很快(ms级)，被测化学信号分子低到分子水平(zm01)。因此，监测递 质释放必须具备超高灵敏度、高选择性、高时间分辨、高空问分辨、超小体积的分析技术。 对分析化学提出了极大的挑战，也带来了机遇，促进了分析化学学科的发展。 本文介绍我们研究组系统研究纳米电化学监测单囊泡及突触间隙释放。单细胞释放前、 后形貌变化定量分析。微流控芯片用于细胞操纵、培养及监测释放的研究。对近几年，国内 外在这一领域的前沿研究也进行评论。展望了未来发展方向u-。 1纳米电极监测单囊泡、单突触及突触间隙释放 (1)监测单囊泡释放：我们研究组12J采用自行研制的碳纤维纳米电极(直径100nm)， 首次监测到单个囊泡释放，使监测达到单囊泡分辨水平。最近，Amatore[3】在“电化学监测 单细胞释放”及Murray[41在“纳米电化学”的评论中，都特别介绍了我们这一单囊泡空间分 辨水平的工作。因至今尚未见到纳米电极空间分辨监测单囊泡释放的其他文献报道。 (2)监测单突触及突触间隙释放：突触间隙一般在10．50rim之间，刚形成连接时，间 隙可大到100rim。由于突触间隙的超微环境，必须开发更小尺寸、能插入突触间隙的纳米 电极，监测细胞间信号传导，这对分析化学家是一个严峻的挑战，至今尚未见文献报道。我 nm，监测PCI2细胞的单突触及突触 们开发出碳纤维锥形纳米电极，电极尖端直径50．100 间隙释放。初度揭开细胞问通讯的面纱，发现胞间通讯具有更为复杂的机制pJ。 2微流控芯片用于单细胞操纵及监测释放 (1)首次研究微流控芯片操纵、传输、监测单细胞释放【2】。Kennedy[6]$平价是最早在生理 研究中，开发微流控芯片的报道。 (2)微流控与64支阵列电极集成化芯片：首次设计成功研制细胞引入、定位、灌注培 养及阵列监测PCI2细胞释放的集成化芯片实验型7。。 3扫描电化学显微镜用于单细胞释放形貌分析 (1)研制新型高灵敏NO微盘传感器，成功地应用于监测单个胎儿脐带静脉内皮细胞 (HlⅣEC)释放NO[引。 (2)扫描电化学显微镜(SECM)对单个HUVEC细胞进行活体三维形貌扫描，及细胞 释放前、后三维形貌分析，首次对细胞三维形貌进行定量计算例。 4未来 (1)开发更小尺寸纳米电极：电极尖端10nm纳米【l们、长径比大、生物相容性好、 易成批制取，能自如插入突触间隙，监测化学信号分子在突触间隙内，更精细的、更贴近真 实的动力学特性。 (2)集成化的微流控芯片：芯片上能够成功构建细胞生理微环境，此外，还可集成多 种检测手段，如电化学及各种光谱学方法，同步获取细胞中的多维信息…1，将涌现出微型化、 集成化、自动化的新一代方法学。 (3)扫描电化学显微镜等显微技术联用：SECM有可能应用于单囊泡释放形貌分析。将 纳米电化学探针与原子力显微镜(AFM)、扫描隧道显微镜(s刑)、透射电子显微镜(TEM) 等显微技术联用，可以提高时间分辨率及空间分辨率，获得细胞更精细的图像【l引。 (4)荧光显微成像：激光扫描共聚焦显微镜及全内反射荧光显微镜等成像技术，对细 胞表面或内部分子分布与运动，进行实时观测的重要手段。最近提出以受激发射损耗(STED) 远场光学纳米显微镜(STEDfar-field opticalnanoscopy)技术，分辨率达到10妯左右。 已成功用于神经细胞释放过程中突触囊泡的实时观察u引，打开了纳米尺度上细胞分子可视化 的大门。 (5)监测脑中化学通讯：脑活体监测化学信号分子瞬时动态变化与行为的相关性。以 多巴胺与行为相关性为例，如吸毒、吸烟、酗酒、恋爱、性冲动及性行为等过程中，实时监 测脑中多巴胺变化。使人们更好理解和控制我们的行为，这是一个新兴的交叉领域u制。 参考文献： [1]程介克，王玮，吴文展，黄卫华，王宗礼， 高等学校化学学报，2