利用细菌人工染色体技术构建表达鹦鹉热衣原体PmpD基因的重组HVT.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 的 10%；C 谱系中只有 1 个 MLVA15 基因型。对分离菌株溯源分析结果表明，A 谱系菌株在世界各国 存在，B 谱系菌株主要在南非和欧洲部分国家流行，C 谱系菌株来源于美国。其中 A 谱系比重最大， 包含了 8 个亚系 952 株分离菌，各国主要流行的亚系有较大差异，南非为 A.Br.Vollum 亚系、欧洲为 A.Br.008/009 亚系、亚洲和中国西部为 A.Br.Aust94 亚系、中国东部和中部为 A.Br.001/002 亚系和 A. Br.Ames 亚系、美国北部为 A.Br.WNA 亚系、美国南部为 A.Br.003/004 亚系。在 Derzelle 的研究中也 得到一致的结果。他们的研究证实了MLVA 和 SNP 在炭疽芽胞杆菌基因分型中具有很好的应用前景， 为流行菌株的分型和溯源提供了一致的参考依据。 从自然爆发炭疽疫情和生物恐怖袭击事件中获得的炭疽分离株往往只有极低的基因多样性，在这 种需要区分遗传进化关系较近的分离株的情况下，MLVA 和 SNP 就不能满足要求。依据 SNR 的原理， 它可区分同一 MLVA 型的近缘分离株，因此成为分子流行病学调查的有效工具。在 Stratilo 和 Garofo lo 的研究中都首先采用了MLVA 分析流行菌株的基因型，再用 SNR 分析各分离株之间的遗传多样性， 清晰细致的阐述了各分离株的遗传进化差异。Beyer 同时采用了三种方法对炭疽芽胞杆菌进行了研究， 获得了大量的数据信息。因此，可以将这三种方法综合应用到今后的研究中，以便于炭疽芽胞杆菌更 准确的分型和溯源。 5 结语 炭疽芽胞杆菌作为一种烈性病原菌和重要的生物战剂在世界各国流行，为了预防和控制炭疽疫情， 坚持长期对其进行流行病学调查和溯源分析是很有必要的。中国炭疽疫情呈散发流行，主要发生在北 方部分省市。在 2009~2011 年间，北方部分省市爆发炭疽疫情 5 起以上，并有逐年上升趋势。为了寻 找传染源，区分本土流行病原和外来病原，并进一步控制炭疽疫情的爆发，对中国流行菌株进行基因 分型是一个有效途径。 近年来，MLVA 、SNP 和 SNR 被广泛采用，但是针对不同的实验目的，三种方法显示出不同的优 势。总的来讲，炭疽芽胞杆菌基因群的划分主要采用 MLVA 和 SNP，可以此结果与国际流行基因型进 行对比分析，适用于流行病学调查。对于近缘分离株的研究主要采用 SNR，它可区分不同疫区的流行 菌株，适用于溯源分析。 面对越来越复杂的国际国内形势，以及炭疽芽胞杆菌可能作为未来战场上生物战剂的严峻局面， 综合采用三种方法对流行菌株进行溯源分析，掌握其来源信息，控制传播途径，是国民健康生产的重 要保证。 参考文献（略） 利用细菌人工染色体技术构建表达鹦鹉热衣原体PmpD 基因的重  组HVT ＊1 ＊1 1 1 ＊＊2 ＊＊1 刘杉杉 ，黄秀芬 ，姜良 ，孙盈 ，何诚 ，李永清 （1. 北京市农林科学院，畜牧兽医研究所，畜禽疾病防控技术北京市重点实验室，北京，100097；2. 中国农业大学 动物医学院，北京，100193） 摘 要 家禽免疫的主要挑战来自于如何设计出只需接种单一剂量就可以防控多种疾病的疫苗。为了实现一针防两病 （禽衣原体病和马立克氏病）的目的，本研究以火鸡疱疹病毒（HVT ）为载体表达鹦鹉热衣原体多型外膜D 蛋白（PmpD ） 抗原，构建同时抗禽衣原体病和马立克氏病的二价活载体疫苗。通过改造已经利用反向遗传技术构建的 HVT 感染性 细菌人工染色体（BAC ）克隆，使其表达PmpD 基因，将重组的 BAC 转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救病毒，获得 HVT 重组体（rHVT-PmpD ）。通过Western blotting 分析感染rHVT-PmpD 的CEF 可知rHVT-PmpD 表达了PmpD 蛋白。 ＊：对本文贡献相同；＊＊：通讯作者