C3H10T12成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控.pdfVIP

第36卷 第 1期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．36 No．1 2015年 1月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Jan． 2015 C3H10T1／2成软骨分化过程中miR一19a与CCND1的 表达及调控 龚 铭 ，周治宇 ，代学俊 ，一，高蔓蔓 ，罗嘉全 ，黄 胜 ，李亮平 1，邹学农 (1．中山大学附属第一医院脊柱外科∥骨科研究所 ，广东广州 510080；2．昆明市延安医院脊柱外科 ，云南 昆明650051) 摘 要：【目的】在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中，探讨miR一19a与细胞周期基因CCND1之间的关系，为揭示 miR一19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】选取小鼠间充质干细胞C3H10T1／2为研究对象，运用离心沉淀 法进行 pellet细胞微球培养，用含有TGF一 及 2％FBS的高糖 DMEM进行成软骨诱导并作为实验组，用含2％FBS的高糖 DMEM培养 (替换)导作为对照组。分别在 1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第 3周进行甲苯胺 蓝染色。 【结果】与对照组比较，细胞功能基因Bax与Klf_4表达均下调，差异具有统计学意义(P0．05)。成软骨分化关键 启动因子SOX一9及相关基因aggrecan，collagenII，CollagenXal的表达均在 2周时显著升高，差异具有统计学意义 (P 0．05)。通过互联网生物信息学预测CCND1可能是 miR一19a的靶基因；在成软骨分化过程中。miR一19a表达逐渐上升 (P 0．05)，而CCND1的表达与对照组相 比逐渐下降(P0．05)。甲苯胺蓝染色 pellet细胞微球呈蓝紫色，细胞核呈深蓝色，诱导 组中细胞外基质含量明显增多。 结【论】在C3H10T1／2成软骨分化过程中，miR一19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降 低 ，分化能力得到增强；且miR一19a参与该分化调控过程。 关键词：mircoRNA：间充质干细胞；成软骨分化 中图分类号 ：R349．53 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672—3554(2015)叭一0071—07 M ir-19aandCCND1GeneExpressioninMechanism ExplorationofC3H10T1／2 ChondrogenicDifferentiation GONGMing，ZHOUZhi—yu，DAIXue-jun ，GAOMan—man，LUOJia-quan，HUANGSheng， LILiang—ping，ZOUXue-nong (1．OrthopaedicResearchInstitute／／DepartmentofSpinalSurgery，TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity， Guangzhou510080，China；2．DepartmentofSpinalSurgery，Yan—AnHospitalofKunmingCity，Kunming650051，China) Correspondingauthor：ZOU Xue—nong，E-mail：zxnong@hotmail．com Abstract：O【bjective】ToexploremiR一19afunctionsthatmayinhibitCCND1expressioninmesenchymalstemcells，weapplied C3H10T1／2stemcellofchondrogenicdifferentiationmodeltoillustratetheregulationofmechanism．M【ethod】 InC3H10T1／2 chondrogenicdifferentiation， weapplyhighcelldensitypelletculturesyste