猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光 RT—PCR检测方法的建立 蒲静 高志强 赖平安 张鹤晓柏亚铎 汪琳 吴 丹乔彩霞 张伟谷强段向英 (北京出入境检验检疫局，北京，101113) 摘要根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保守基因序列设计合成引物和Taq— Man荧光探针，并对其进行了优化筛选；对荧光RT—PCR的反应条件进行优化，建立了 病猪场采集的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果，该方法与病毒分离检测方法的阳性符 合率为100％。同时对建立的荧光RT—PCR进行重复性试验，结果表明，该方法具有良好的 重复性，可满足当前PRRS的诊断需要。 关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒；荧光RT—PCR；TaqMan荧光探针 Real——timePCRProtocolforDetectionof Porcine Reproductive and VirusAmercian inSwine RespiratorySyndrome type and real—TimePCRwere Abstract：Oligonucleotideprimersprobes(TaqMan-labled)for selectedfromthemostconservedofthePRRSV then，reaction regions genomes，and parame— terswere to areal—Time RT—PCR serial optimizeddevelop TaqMan assay．Byusing cellculture dilutionsforthePRRSVisolateVR-2332，thereal—TimeRT—PCRcouldde— developed assay tect1essthan1 ofPRRSVandits was100times TCID50／0．1ml thanthatof sensitivity higher theroutineRT-PCR．Clinicalofswine serumandvarioustissuecollected samples including from farmsin 2005--2007wereexaminedthe many years using real—TimeRT— detectedPRRSV real—TimeRT—PCRwereex— PCR．Subsequently，somesamples positiveby aminedvirusisolation aresult，ClinicaldetectedPRRSV real— by again．As samples positiveby timeRT—PCRwerealsoexaminedPRRSV virus