荧光定量RT-PCR检测脑心肌炎病毒方法的建立及初步应用.pdfVIP

2015年 1月 四川大学学报 (自然科 学版 ) Jan．2015 第52卷 第 1期 JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．52 No．1 doi：i03969／j．issn．0490—6756．2015．01．036 荧光定量 RT—PCR检测N,6肌炎病毒方法的 建立及初步应用 袁 源 ，许 锬 ，郑朝共 ，容新宗 ，黄 琰 ，苗 松 ，张雪梅 (1．四川大学生命科学学院。成都 610064；2．成都蓉生药业有限责任公司，成都 610041) 摘 要：根据 GenBank中公布的脑心肌炎病毒 (EncephalomyocarditisvirusEMCV)3D基因 保 守区段设计并合成 1对引物 ，以提取 的 EMCV核 酸为模板 ，分别进行 荧光定量 RT—PCR 扩增 ，优化反应体系及条件 ，建立脑心肌炎病毒荧光定量 RT—PCR检测方法，并初步运用于 静注人免疫球 蛋 白(IVIG)纳米膜过滤工艺去 除 EMCV 效果 的验证．结果显示该 方法 实验 内 和实验间的精 密度均小于 5 ，最低检测限为 10copies／ L；纳米膜过滤工艺可使样品 中的 EMCV滴度 下降4Logs． 关键词：荧光定量 RT—PCR；脑心肌炎病毒；钠米膜 ；病毒去除 中图分类号 ：Q78；R373 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2015)01—0205—05 DevelopmentandpreliminaryapplicationoffluorescentquantitativeRT-PCR method fordetectionofencephalomyocarditisvirus YUAN Yuan ，XU Tang ，ZHENG Chao—Gong。，RONG Xin—Zong。， H UANG Yan。，M IAO Song ，ZHANG Xue—M ei (1．CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China； 2．ChengduRonsenPharmaceuticalsCo．，Ltd．，Chengdu610041，China) Abstract：BasedODtheconservativeregionof3D geneofEncephalomyocarditisvirus(EMCV )published inGenBank，apairofprimerswereDesignedandsynthesized．UsetheextractedEM CV nucleicacidasa templateforfluorescencequantitativeRT—PCR amplification，optimizationofreactionsystem andcondi— tions．Establishencephalomyocarditisvirus(EMCV)fluorescencequantitativeRT—PCR detectionmeth— od，andappliedto staticnotehuman immunoglobulin (IVIG)nanomembranefiltrationprocesstore— moveEMCV effectvalidation．Theresultsshowedbothoftheprecisionofintraandinterassaywas 5 inCt，andthelowestdetectivelimitwas10copies／／iL．Nanomembranefiltrationprocesscanmake thesamplesofEM CV dropsfell41ogs． Keywords：QuantitativeRT—PCR；Encephalomyocarditisvirus；nano—membrane；Virusremoval