不同养殖季节仿刺参肠道与养殖环境中菌群结构的特点【精选】.pdfVIP

第 33卷第 9期 水 产 科 学 VO_【33No．9 2014年 9月 FISHERIES SCIENCE Sep．20l4 不同养殖季节仿刺参肠道与养殖环境中菌群结构的特点 李建光，徐永平，李晓宇，王丽丽，包鹏云，蒲红宇，车 鉴，王熙涛 (大连理工大学 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024) 摘 要 ：应用变性梯度凝胶 电泳技术分析在不 同养殖季节环境 中，仿刺参肠道 、养殖水体和池塘底泥 中菌群结构的特点。试验结果表 明，在不同的养殖季节中，仿刺参肠道 、养殖水体和池塘底泥 中菌群结 构仅有很少差别，仿刺参菌群组成相对稳定 。 变形杆菌和 变形杆菌的菌属是出现最多的菌群 ，其 次是p一变形杆菌、￡一变形杆菌、螺旋体 目、拟杆菌门、纤维黏菌 目和衣原体 目。刺参肠道的优势菌属主 要 由弧菌属、玫瑰杆菌属、发光杆菌属和假交替单胞菌属等组成 ；养殖水体 的优势菌属主要 由弧菌属、 玫瑰杆菌属 、绿屈挠菌属和希瓦氏菌属等组成 ；池塘底泥 的优势菌属主要由弧菌属 、土壤杆菌属和小球 菌属等组成 。 关键词 ：变性梯度凝胶 电泳 ；菌群结构 ；刺参 中图分类号：S917．1 文献标识码 ：A 文章编号：1003一ill1(2014)09—0562—07 仿刺参 (Apostichopusjaponicas)具有很高 的 变性梯度凝胶电泳方法 ，对不同养殖季节 中的仿刺 经济价值和药用价值，是一种药食 同源 的海洋生 参肠道、养殖水体和池塘底泥的菌群结构多样性进 物[1]。随着仿刺参工厂高密度集约化养殖业 的发 行分析。以期为发展刺参细菌分子分析和益生菌 展 ，应激原的增多，导致仿刺参 的免疫力下降，病害 的筛选提供理论基础。 发生频繁，已成为制 约刺参产业 发展 的瓶颈 问 1 试验材料和方法 题L3]，与之相关的刺参菌群成为亟需研究 的对 象 ， 菌群与刺参之间存在着密切的共生关系，它们是生 1．1 样品的收集和处理 态系统选择的结果 ，蕴含着养殖生物代谢所需的环 采样点为大连金州鹿岛刺参养殖基地，养殖模 境条件 ，直接影响着刺参的物质循环 、病害发生、免 式为放苗半精养养殖。采样时间为2012年4月 ，平 疫功能、营养需求和生长环境等[4]。通过研 究不 均盐度 3O，平均水温 18℃；2012年 9月，平均盐度 同刺参养殖季节环境菌群 的结构特点，可以为益生 31，平均水温 21℃。每 日投 喂大叶菜 (Sargassum 菌的筛选奠定基础 ，对健康养殖具有重要意义。 pallidum)、鼠尾藻 (S．thunbergii)等天然饵料 。 分析刺参菌群结构 的主要难题之一是绝大多 水体 日换水一次 ，换水量 1O ～2O 。 数微生物不能用传 统的方法进行培养 [6]。分子生 刺参养殖池底泥沉积物样品：用 3m 的虹吸管 物学技术可以避免培养微生物的过程，解决这个分 采集池底环沟区和中央 区沉积物泥样 ，将其混合至 析的不足 。其 中变性梯度凝胶 电泳是一项用来评 无菌瓶中处理。取 内层样 品 1g，40mL的无菌磷 价各种生态系统 中菌群多样性和优势菌种分布情 酸盐缓冲溶液悬浮，振荡 3～5rain，使样品均匀浑 况的技术 [7]。这项技术通过对 16SrDNA 进 行 浊。2000r／rain离 心 5rain，收集上清液 ，弃去沉 PCR扩增，提供可培养和不可培养 的菌群图谱 ，然 淀。如果沉淀太多，可 以重