小型猪牙胚离体%2f在体培养模型建立.pdfVIP

生障碍，细胞极性消失，成牙本质细胞突起形成障碍。成牙本质细胞功能分化障碍，牙 本质特异性基质蛋白Dsp表达降低。 TGF一13信号通路对小鼠磨牙牙根发育具有调控作用。 关键词：Tgfbr2条件基因敲除成牙本质细胞分化牙源性上皮 小型猪牙胚离体雇体培养模型的建立 李昂宋铁砾范志朋王松灵 首都医科大学13腔医学院基因治疗及牙齿再生分子生物学实验室 前言：牙齿是典型的上皮．间充质细胞相互诱导发育的器官，其发生和发育是一个 非常复杂的生物学过程，目前对牙胚发育过程中上皮．间充质细胞相互作用的调控机制 及微环境的影响仍缺乏系统深入了解。直接在机体口腔内研究牙齿发育机制，易受复杂 的局部环境的干扰，也不便于施加人为干预。因而需要建立一种简便易行、科学可靠， 既不影响牙胚继续发育，又可人为干预的牙齿发育研究模型。目前普遍采用的牙齿发育 研究模型多直接取材于发育中的牙胚体外培养，或将发育不同阶段的牙胚植入宿主动物 的皮下、肾被膜下等部位。与小鼠相比，小型猪口腔颌面部解剖结构等与人类更为接近， 尤其是小型猪有乳、恒牙两个牙列；其下颌乳磨牙，无论形态、功能，都与人类下颌磨 牙相似。所以研究小型猪牙齿发育，在这种大型哺乳动物模型中进行牙齿发育阶段生物 大分子的能证验功，更有可能解释人类牙发生发育的机制，是未来牙再生临床应用前的 重要一步。 目的：本实验拟建立小型猪牙胚的在体／离体培养模型，用于研究大型哺乳动物牙 发生发育机制，为牙组织工程再生奠定实验基础。 方法：本研究选用中国实验用五指山小型猪(孕猪)，分别为不同妊娠天数。麻醉 后取出胎猪，选取胎猪乳磨牙牙胚。将牙胚置于三维生物反应器中培养；牙胚与颌骨共 同置于三维生物反应器中培养；牙胚体外培养9天后重新植入裸鼠体内；牙胚与颌骨段 直接植入裸鼠体内。最后固定、脱钙及HE染色，镜下观察。 结果：本研究发现小型猪牙胚可在三维培养条件下长期存活并缓慢发育。在体外三 维培养条件下，需要周围骨组织提供发育信号；牙乳头结构基本正常，但牙囊(主要含 胶原纤维和血管)结构萎缩，影响牙釉质层发育。小型猪牙胚在裸鼠体内(皮下)可形 成带血管的牙囊结构，可以继续完成牙胚细胞分化及组织分化的全过程，也能够发生钙 化。 结论：本研究证实，小型猪牙胚在体外三维培养后移植到裸鼠皮下继续生长，该方 法既能有效的施加干预因素，又能较好完成牙齿的发育过程，是研究大型动物牙胚发育 机制的有效模型。 小型猪牙胚细胞重组牙齿再生研究 王福王松灵 首都医科大学121腔医学院涎腺疾病中心和基因治疗与牙再生分子实验室 背景：组织工程牙简单来讲就是将从组织中分离培养的牙源性或非牙源性细胞借助 或不借助生物材料载体，通过模拟自然牙发育的微环境，在体外或体内形成有活性的牙 齿或牙齿样结构。其最终目的是模拟体内细胞生长微环境，实现人工牙组织和器官再生。 种子细胞、生物支架和微环境被认为是组织工程的三要素。目前生物工程牙再生大体分 为部分牙再生和全牙再生，主要技术策略大致包括3类：一是直接将牙源性细胞复合生 物支架材料进行体内移植，如牙髓、牙本质、牙周膜再生和生物牙根再生等；二是模拟 牙胚发育过程，利用牙源性月}牙源性的上皮和间充质细胞重组工程牙胚，实现全牙再 生；三是单纯利用生物材料或复合生长因子模拟微环境诱导自体细胞归巢实现牙向分 化。通过胚层重组构建组织工程化牙胚是近年来研究的主流，该方法模拟牙胚发育模式， 被认为是最有可能实现全牙再生的方法。构建工程化牙胚必需包括上皮和间充质2种细 胞，通过组织工程技术重建上皮和间充质的相互作用，模仿牙发生发育过程。目前基于 2种细胞牙胚重组的组织工程牙再生取得了很大进展，2009年Tsuji研究组将鼠帽状期 牙胚上皮和间充质解离成单细胞后，通过细胞团胚层重组，回植到鼠颌骨上实现了全牙 再生，为全牙再生带来曙光。目前绝大多数的相关研究是基于鼠，而在大型动物小型猪 的研究较少。尚无小型猪牙胚重组再生的报告。小型猪的双牙列及牙齿形态和数量与人 非常类似，通过在大型动物上进行猪牙胚发育的相关研究，为进一步进行人类牙再生提 供借鉴。 45