去氢表雄酮的抗氧化保护作用和其机理.pdfVIP

160 中国癌症研充进展@ 去氢表雄酮的抗氧化保护作用及其机理 杨笋 韩锐 性激素的前体，在体内以其硫酸酯DHEAS的形式进人血液循环，经不同酶作用后转化为雄性 激素睾酮或雌酮等一系列雌性激素。与其他甾体类激素不同的是，血浆中DHEA及DHEAS 随着年龄的增长浓度下降特别明显。从30岁左右开始，机体内DHEA水平即开始下降，到75 of E， 岁时几乎绝大多数人血浆中DHEA浓度减少了95％(DHEA：ACC¨ingAge，John 有较好的化学预防作用，可有效预防DMBA诱发的大鼠乳腺癌∞J，并发现DHEA可提高机体 免疫力，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用【4’5J。活性氧自由基涉及多种疾病，如辐射损 伤、突变、癌症及衰老等，过多的自由基会对周围环境中的细胞、组织或生物大分子造成损伤， 在衰老及肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用怕J。我们利用小鼠胸腺细胞，研究DHEA 对活性氧自由基的抗氧化保护作用，进一步探讨DHEA抗突变及增强机体免疫力的机理。 材料与方法 mmol／L mmol／L NaOH，Imol／I．NaCI)；细胞消化液(10EDTA，50 NP-40，0．5 mg／ml蛋白酶K)。 2．动物雌性BALB／c小鼠．5～6周龄。 3．仪嚣 KP490滤光片)；Olympas照相系统。 4．制备胸腺细胞悬液将BALB／e小鼠放血处死，无菌取胸腺，剪碎后置于不锈钢丝网 含10％热灭活的小牛血清，0．1U／L青霉素，0．1U／L链霉素。 5．超微弱发光法测DHEA对DNA氧化损伤的保护作用常规建立黄嘌呤氧化酶．黄嘌 呤．DNA氧化损伤实验体系，以鲁米诺(0．2mmol／L，pH10．2)作为发光增强剂，应用超微弱发 光测定仪检测DNA氧化损伤程度，并以相应软件处理结果。 作者单位：100050北京，中国协和医科大学药物研究所 击氢表雄酮的抗氧化保护作用及其机理 161 胞悬液接种于25 dn2培养瓶中，与不同浓度DHEA在37℃、50,6032孵箱中混合培养12h后． 速混匀，吸取90肛l均匀涂于底层胶上，冰上成胶5min。将固定好的微凝胶玻片，浸人溶解液 中，约1h后取出冲净。再浸人解旋液中，约10min后取出冲净，呈水平状浸入电泳槽中65伏 电压下电泳10～20min，取出冲净以EB染色10rain，在反射式荧光显微镜下观察并照相。 7．DHEA对氧化所致胸腺细胞凋亡的DNA琼脂糖电泳分析常规取胸腺制成单细胞悬 液(4×106个／mi)接种培养瓶，加入不同浓度DHEA于37℃、596COz孵箱中混合培养8h后， 将细胞离心去上清。以PBS重悬细胞并加人}1202(终浓度为50 min后以 tanol／L)，反应5 PBS洗细胞2次，悬浮于细胞消化液中(107细胞／o．5m1)。50℃消化1h后加0．25 mg／ml RNaseA(终浓度)于50℃继续消化1h。13 rain取上清加2．5倍体积乙 000Xg，室温离心10 醇，一70℃过夜沉淀DNA，13 000Xg离心10m．in收集DNA，干燥后溶于TE缓冲液，测定 DNA含量。取10--25 nagDNA与上样缓冲液混匀，于1．5％琼脂糖凝胶电泳(6V／era)。EB 染色后紫外光下观察结果并照相。 200 度DHEA混合培养8h，1