自身免疫病的表观遗传发病机制，早期生物学标记与治疗目标.pdfVIP

中华中医药学会皮肤性病分会第七次学术年会 2010重庆·四川中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编 特邀演讲及专题讲座篇 自身免疫病的表观遗传 发病机制，早期生物学标记和治疗目标 陆前进 中南大学皮肤性病研究所 中南大学湘雅二医院皮肤性病科 中南大学湘雅二医院表观遗传研究中心 [摘要] 随着人类基因组计划的完成，这本由ATCG组成的生命天书已经摆在了所有生命科学领 域科学家的案头，正确理解和阅读这本书已经成了生命科学的当务之急。表观遗传学研究 是破译这本生命天书的有效工具。其涉及的机制主要包括DNA甲基化，组蛋白修饰及染色 质重塑。DNA修饰主要是胞嘧啶的甲基化，DNA甲基化导致基因沉默。组蛋白尾部修饰可影 响组蛋白与DNA双链的亲和性而改变染色质的疏松或凝集状态，还可以影响与染色质结合 的蛋白质因子的亲和性，影响识别特异的DNA序列的转录因子与之相结合的能力，对基因 表达调控具有类似DNA遗传密码的作用，故被称作“组蛋白密码”，其中组蛋白乙酰化和 甲基化尤为重要。 DNA甲基化在T细胞基因表达调控和维持T细胞正常功能中起重要作用。近年来我们的 研究结果表明DNA甲基化水平低下的成熟T细胞在体外具有自身反应性，在体内能复制出狼 Y 细胞共刺激分子)；Perforin(细胞毒分子)；IgEFcRl(TCR‘链替代物)及CD40LG(共刺 Y 激分子)。实时定量RT-PCR结果表明CDlla、CD70、Perforin、IgEFcR1均在活动性系统 亚硫酸盐基因组测序证实了活动性SLET细胞和经5一氮胞苷处理的正常T细胞CDlla、CD70、 Y Perforin及IgEFcRl调控序列均在同一特定的调控序列出现低甲基化。其中CDlla、 Y Perforin及IgEFcR1的低甲基化程度与疾病活动性～致。体外将这些特定区域人工甲基 化，均能明显抑制这些基因的活性。用实时定量RT-PCR和流式细胞仪的方法比较甲基化转 且低甲基化部分均为相同序列。功能研究结果显示CDlla过度表达的T细胞具有自身反应性， 在小鼠体内能复制出狼疮样模型；CD70过度表达辅助自身B细胞产生大量自身抗体； Perforin过度表达的T细胞杀伤自身的巨噬细胞；过度表达的IgEFcRY1导致TCR信号异 ．51． 中华中医药学会皮肤性病分会第七次学术年会 2010重庆·四川中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编 特邀演讲及专题讲座篇 常。 为什么SLE在女性高发呢?众所周知，男性只有1条x染色体，而女性拥有2条染色体， 其中1条处于失活状态，DNA甲基化是x染色体失活的重要机制之一。CD40LG是X染色体编 码基因，我们的研究结果显示CD40LG仅在女性活动性SLECD4+T细胞过度表达(p=O．03)。 亚硫酸盐基因组测序显示正常男性CD40LG启动子和下游增强子几乎全部去甲基化，而女性 一半为甲基化、一半为去甲基化(pO．01)，且女性SLECD4+T细胞较正常女性低甲基化 (p=O．02)。5一氮胞苷通过使调控序列低甲基化而上调女性CD4+T细胞CD40LGmRNA及蛋白 的表达，而对男性无明显影响(P分别=0．03，P=O．04)。体外将特定区域人工甲基化，能明 显抑制CD40LG基因的活性。CD40LG过度表达辅助自身B细胞产生大量自身抗体。因此，我 们可以推测失活的x染色体上CD40LG因其启动子和下游增强子低甲基化而被重新激活，使 女性过度表达CD40LG，从而产生自身抗体，使女性狼疮易感性增加。 目前对SLE的组蛋白修饰研究主要集中在动物模型方面，我们通过研究发现，系统性 红斑狼疮患者CD4+T细胞组蛋白H3／H4存在不同程度的低乙酰化状态，组蛋白H3K9甲基化 时MRL—ipr狼疮小鼠CD4+T细胞中也存在组蛋白修饰酶的表达异常，大体与SLE中相似，与 和EZH2 mRNA显著降低，仅去乙酰化酶SIR